产品名称 | 兔骨髓来源巨噬细胞 | 组织来源 | 骨髓 |
英文名称 | Rabbit Bone Marrow-Derived Macrophages | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3710 |
方法简介 实验室分离的兔骨髓来源巨噬细胞采用分离骨髓单个核细胞经细胞因子诱导分化法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔骨髓来源巨噬细胞经CD68免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔骨髓来源巨噬细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、M-CSF、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 巨噬细胞样
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 利多卡因（12 mM）
兔骨髓来源巨噬细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，采集血液或提取组织免疫细胞
试剂：Ficoll密度梯度分离液、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、RPIM-1640或DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
采集实验动物全血或获取组织悬液，用PBS稀释至适当体积
缓慢叠加于Ficoll密度梯度分离液上方，室温2000rpm离心20分钟
收集界面白色单个核细胞层，用PBS洗涤2次，300g离心8分钟
用含10%FBS的RPIM-1640完全培养基重悬细胞，计数并检测活力
可采用磁珠分选法进一步富集目标免疫细胞亚群(如CD11b+巨噬细胞、CD3+T细胞等)
原代培养要点
免疫细胞多为悬浮或弱贴壁生长，使用完全培养基RPIM-1640+10%FBS+1%双抗
37度、5% CO2培养，初始接种密度建议1x10^6 cells/mL
巨噬细胞培养可添加M-CSF(20ng/mL)促进增殖和维持表型
T细胞培养需添加IL-2(10ng/mL)和抗CD3/CD28抗体刺激增殖
常见问题优化
免疫细胞活力差：操作全程保持低温，避免反复离心和吹打
细胞凋亡：培养基中添加IL-4(20ng/mL)和IL-10(10ng/mL)可抑制巨噬细胞凋亡
纯度不够：采用MACS磁珠分选可获得纯度>95%的目标免疫细胞
大鼠琥珀酸半醛脱氢酶(SSADH)elisa试剂盒 | KNS-62非小细胞肺癌 |
大鼠血钠(SS)elisa试剂盒 | 兔主动脉瓣膜间质细胞 |
大鼠信号识别颗粒54a(Srp54a)elisa试剂盒 | 兔支气管平滑肌细胞 |
大鼠血清反应因子(SRF)elisa试剂盒 | 小鼠肺大静脉平滑肌细胞 |
大鼠Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1(Rock-1)elisa试剂盒 | 类滤泡状甲状腺癌细胞肺转移FTC-238(STR鉴定正确) |
大鼠RNA结合基元蛋白41(Rbm41)elisa试剂盒 | 兔小肠成纤维细胞 |
猪羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGR）elisa试剂盒 | 人原代脉络膜成纤维细胞 |
CHO/dhFr-仓鼠卵巢,二氢叶酸还原酶缺陷细胞专用培养基 | ATAD3C基因过表达细胞株 |
LS1034人结肠腺癌细胞专用培养基 | GOLGA8H基因过表达细胞株 |
人原代心脏微血管周细胞专用培养基 | HEXD基因过表达细胞株 |
猪原代胸腺成纤维细胞专用培养基 | ACCSL基因过表达细胞株 |
人原代子宫内膜基质细胞专用培养基 | CCNT1基因过表达细胞株 |
兔骨髓来源巨噬细胞PANC-1细胞专用培养基 | FEZF2基因过表达细胞株 |
人原代乳腺成纤维细胞专用培养基 | CHRDL1基因过表达细胞株 |
试剂与耗材预处理：将兔骨髓来源巨噬细胞完全培养基、PBS 缓冲液置于 37℃水浴复温，T25 培养瓶、移液管、离心管放入超净台紫外照射 30min，检查培养基无浑浊沉淀，确认细胞状态相关耗材齐全。
旧培养基去除：取出培养瓶，75% 酒精擦拭瓶身外壁，移入超净台，缓慢吸弃瓶内旧培养基，避免吸管触碰细胞贴壁层面，防止刮伤贴壁巨噬细胞。
洗涤去除杂质：加入 3‑5mL 无菌 PBS 缓冲液，轻轻晃动培养瓶，浸润全部细胞生长底面，充分洗去残留血清、细胞碎片，之后缓慢吸除 PBS，重复洗涤 1 次。
换液 / 传代处理：若是换液操作，直接加入 5‑6mL 预热完成的兔骨髓来源巨噬细胞完全培养基；若是传代，加入消化工作液室温孵育，镜下观察细胞形态变圆后立刻加入完全培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
细胞分装铺板：将混匀后的细胞悬液转移至无菌离心管，1000r/min 离心 5min，弃上清，加入新鲜完全培养基重悬细胞沉淀，按照实验需要的细胞密度接种至新培养瓶或者培养板。
细胞培养孵育：拧紧培养瓶瓶盖，做好细胞名称、日期标记，酒精擦拭瓶外壁，放入 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱，平放静置培养，避免频繁挪动培养瓶。
后续状态监测：24h 后显微镜观察细胞贴壁、形态、污染情况；巨噬细胞 3‑4 天进行半量换液，去除悬浮死细胞，密切关注是否出现细菌、真菌污染，记录细胞生长状态。
