兔骨髓单核细胞

兔骨髓单核细胞

运用 Percoll 密度梯度离心法从新西兰大白兔骨髓单核细胞外周血或组织中提取单个核细胞，经免疫磁珠分选（MACS）或流式分选（FACS）纯化目标免疫细胞亚群后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，使用含细胞因子（IL-4、IL-13 或 GM-CSF）的 IMDM 培养基培养；通过流式细胞术多色分析 CD11c、MHC-II、CD80/86 等共刺激分子表达谱，结合 ELISA 检测细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-10）分泌水平鉴定免疫细胞功能表型。

产品名称：兔骨髓单核细胞

英文名称： Rabbit Bone Marrow Monocytes

组织来源： 骨髓

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔骨髓单核细胞采用密度梯度离心法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔骨髓单核细胞经CD68免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔骨髓单核细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 巨噬细胞样

传代比例： 不传代

传代特性： 不增殖；不传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔骨髓单核细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

实验前期准备：超净台紫外消毒 30min，37℃水浴预热骨髓单核细胞专用培养基、无菌 PBS；准备 15mL 无菌离心管，全部耗材酒精消毒后进入操作台；骨髓单核细胞悬浮生长，不需要包被培养瓶。

冻存细胞复苏：取出液氮保存的兔骨髓单核细胞冻存管，37℃水浴快速晃动融化，尽量缩短融化时间；冻存管外壁喷洒 75% 酒精，移入无菌超净台。

去除冻存保护剂：将冻存管内细胞悬液转移至含有 4mL 预热完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀；转速 1000r/min 离心 5min，小心吸弃上层含有 DMSO 的上清液，保留管底细胞沉淀。

悬浮细胞接种：加入 3‑4mL 骨髓单核细胞完全培养基重悬细胞沉淀，充分吹打混匀；将细胞悬液转移至 T25 培养瓶，无需等待贴壁，直接放入 37℃5% CO₂培养箱悬浮培养。

半换液维护：骨髓单核细胞悬浮生长，培养 24h 后镜检细胞状态；采用半换液方式，吸取一半旧培养基丢弃，补加同等体积新鲜预热完全培养基，后续每 2 天半量换液，不要全部弃掉上清。

细胞扩增传代：细胞密度升高后，直接收集全部细胞悬液至离心管，1000r/min 离心 5min 弃上清，加入新鲜培养基重悬，分至新培养瓶，完成传代扩增；该细胞为悬浮细胞，不使用胰酶消化。

细胞功能实验与冻存：细胞达到合适密度，可开展吞噬、免疫刺激、流式检测等实验；冻存时收集悬浮细胞离心沉淀，加入冻存液分装冻存管，程序降温盒梯度降温后液氮保存；严格避免贴壁细胞污染。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。