产品名称 | 兔肝动脉平滑肌细胞 | 组织来源 | 肝动脉组织 |
英文名称 | Rabbit Hepatic Artery Smooth Muscle Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3639 |
方法简介 实验室分离的兔肝动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔肝动脉平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔肝动脉平滑肌细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔肝动脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，组织取材需保持血管/器官完整性
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、平滑肌细胞专用培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织(血管/器官平滑肌层)，用预冷PBS反复冲洗去除血液
仔细分离去除外膜和黏膜层，仅保留平滑肌层组织，剪碎至1-2mm3
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合液，37度消化40-60分钟，期间振荡2-3次
消化完成后过滤(70um+40um)，300g离心10分钟收集细胞沉淀
细胞悬液接种于培养皿中，采用差速贴壁法24小时后换液去除非贴壁细胞
原代培养要点
平滑肌细胞贴壁能力较强，接种后24-48小时可见贴壁细胞呈梭形生长
使用含20%FBS的DMEM/F12完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时进行传代
平滑肌细胞传代时使用0.25%胰蛋白酶消化5-10分钟，离心收集后重新接种
常见问题优化
细胞纯度不高：可采用药物筛选法(5-氟尿嘧啶20uM处理48小时去除非平滑肌细胞)
平滑肌细胞表型转换：控制传代次数在5代以内，培养基中保持适当FBS浓度(10-20%)
细胞生长缓慢：添加10ng/mL PDGF-BB可促进平滑肌细胞增殖
大鼠信号传导子及转录激活子2(STAT2)elisa试剂盒 | COR-L105非小细胞肺癌 |
大鼠甾体合成急性调节蛋白(StAR)elisa试剂盒 | 兔心肌细胞 |
大鼠生长抑素受体2(SSTR2)elisa试剂盒 | 小鼠结膜囊成纤维细胞 |
大鼠氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)elisa试剂盒 | 小鼠气管平滑肌细胞 |
大鼠Ras(Ras)elisa试剂盒 | 人卵巢癌细胞A2780(STR鉴定正确) |
大鼠Ras同源基因家族成员A(RhoA)elisa试剂盒 | 兔脐静脉内皮细胞 |
猪清道夫受体（SR）elisa试剂盒 | 大鼠原代脂肪微血管内皮细胞 |
UMR-106大鼠骨肉瘤细胞专用培养基 | SLC9A4基因过表达细胞株 |
LNCaP clone FGC人前列腺癌细胞专用培养基 | BMP8A基因过表达细胞株 |
小鼠原代肝内胆管上皮细胞专用培养基 | ADAL基因过表达细胞株 |
人原代羊水干细胞专用培养基 | MED25基因过表达细胞株 |
人脂肪干细胞永生化细胞专用培养基 | LZTS3基因过表达细胞株 |
兔肝动脉平滑肌细胞PA317细胞专用培养基 | CHRDL1基因过表达细胞株 |
小鼠原代脂肪细胞专用培养基 | KLHL4基因过表达细胞株 |
实验环境预处理：超净台紫外灭菌 30min，水浴锅调至 37℃，取出平滑肌细胞专用完全培养基、PBS、胰酶消化液水浴复温；准备 T25 培养瓶，加入 5mL 平滑肌完全培养基，放置 CO₂培养箱预温 15min，所有耗材酒精消毒后入台。
冻存细胞快速融化：取出液氮中保存的兔肝动脉平滑肌细胞冻存管，37℃水浴快速摇动融化，控制融化时间不超过 2min，残留少量冰晶即可；冻存管外壁喷洒 75% 乙醇，移入无菌操作台内。
去除冻存保护剂：将冻存管内细胞悬液缓慢转移至含有 4mL 预温完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀；转速 1000r/min 离心 5min，小心吸除上层含有 DMSO 的上清液，保留管底细胞沉淀。
铺板贴壁培养：向离心管内加入 2‑3mL 平滑肌完全培养基，轻柔吹打充分重悬细胞沉淀；将细胞悬液全部转移至预平衡的 T25 培养瓶，十字方向轻柔晃动培养瓶，让细胞均匀分布瓶底，放入 37℃5% CO₂培养箱静置 24h，禁止挪动。
换液清除杂质：培养 24h 后取出培养瓶，倒置显微镜观察细胞贴壁情况，吸除含有死细胞、细胞碎片的旧培养基，加入 5mL 新鲜预热完全培养基，放回培养箱持续培养，后续每 2‑3 天更换一次培养基。
细胞传代扩增：细胞汇合生长至 80%‑90% 开展传代；弃旧培养基，PBS 清洗细胞表面 2 次；加入 1mL 胰酶消化液浸润细胞，镜下见细胞收缩变圆，立刻添加等量完全培养基终止消化；吹打收集细胞悬液，离心弃上清，按 1:2 比例分瓶接种，补加培养基培养。
细胞应用与冻存：细胞达到实验所需数量，直接用于血管相关功能、蛋白表达等实验；需要保种时，细胞沉淀加入无血清冻存液重悬，分装冻存管，程序降温后液氮储存；注意平滑肌细胞避免过度消化，防止细胞表型发生改变。
