兔肺微血管内皮细胞

兔肺微血管内皮细胞

运用组织块贴壁-酶消化联合法分离新西兰大白兔肺微血管内皮细胞，经密度梯度离心纯化内皮祖细胞后接种于明胶包被培养表面，采用含有血管内皮生长因子（VEGF 20 ng/mL）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF 5 ng/mL）和肝素（5 μg/mL）的 MCDB-131 培养基培养；通过免疫荧光检测 CD31、CD146、eNOS 表达，流式细胞术分析 CD31+/CD146+ 双阳性细胞比例，并经管状结构形成实验验证内皮细胞功能特性。

产品名称：兔肺微血管内皮细胞

英文名称： Rabbit Pulmonary Microvascular Endothelial Cells

组织来源： 肺组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔肺微血管内皮细胞采用组织贴块法并结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔肺微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 兔肺微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： Accutase消化液或0.25%胰蛋白酶

兔肺微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

显微镜观察细胞汇合 80‑85%，吸除瓶内旧培养基。

PBS 缓冲液冲洗微血管内皮 2 次，吸净 PBS 液体。

内皮消化液铺满瓶底，37℃孵育 3‑5min，镜下细胞变圆松动。

兔肺微血管内皮完全培养基终止消化，轻柔吹打制悬液。

悬液转入离心管，1000r/min 离心 5min，弃上清。

微血管内皮专用培养基重悬沉淀，分瓶接种。

37℃、5% CO₂培养箱静置，24h 观察贴壁，2‑3 天更换培养基。

1.取材过程中需保持组织湿润和低温，血管组织离体后超过30分钟会导致内皮细胞活力明显下降。

2.培养器皿需用0.2%明胶预包被30分钟，PBS洗涤后加入内皮细胞专用培养基方可接种。

3.内皮细胞增殖较快，培养5-7天即可达到融合，传代时注意控制胰酶消化时间不宜过长。

4.培养基中需添加EGM-2内皮细胞生长添加剂套装，包含VEGF、FGF-b、EGF和hydrocortisone等关键生长因子。

5.培养期间每48小时换液一次，观察细胞融合情况，融合度达90%以上时进行传代处理。