兔肺泡巨噬细胞

兔肺泡巨噬细胞

运用 Percoll 密度梯度离心法从新西兰大白兔肺泡巨噬细胞外周血或组织中提取单个核细胞，经免疫磁珠分选（MACS）或流式分选（FACS）纯化目标免疫细胞亚群后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，使用含细胞因子（IL-4、IL-13 或 GM-CSF）的 IMDM 培养基培养；通过流式细胞术多色分析 CD11c、MHC-II、CD80/86 等共刺激分子表达谱，结合 ELISA 检测细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-10）分泌水平鉴定免疫细胞功能表型。

产品名称：兔肺泡巨噬细胞

英文名称： Rabbit Alveolar Macrophages

组织来源： 肺组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔肺泡巨噬细胞采用肺泡灌洗结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔肺泡巨噬细胞经CD68免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 兔肺泡巨噬细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 巨噬细胞样

传代比例： 不传代

传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液： 利多卡因（12 mM）

兔肺泡巨噬细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

镜下观察细胞汇合 75‑80%，缓慢吸弃旧巨噬细胞培养基。

PBS 轻柔冲洗细胞层 2 次，巨噬贴壁牢固，吸除 PBS。

巨噬细胞消化液加入培养瓶，37℃孵育 4‑6min，镜检细胞脱壁。

兔肺泡巨噬细胞完全培养基终止消化，充分吹打收获悬液。

悬液移入离心管，1000rpm 离心 5min，舍弃上清废液。

肺泡巨噬专用完全培养基重悬沉淀，分装接种。

37℃、5% CO₂培养箱培养，24h 观察贴壁，2‑3 天换液。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。