兔肺动脉成纤维细胞

兔肺动脉成纤维细胞

从新西兰大白兔肺动脉成纤维细胞组织标本经机械分离与胶原酶 II 联合消化获取成纤维细胞，经差速贴壁法纯化后接种于纤维连接蛋白包被培养皿中，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、2 mM L-谷氨酰胺及 1% 非必需氨基酸）维持培养；通过免疫荧光检测 FSP-1/S100A4、α-SMA（活化型）及 PDGFR-β 表达，Western blot 分析细胞外基质蛋白（胶原 I、纤连蛋白）分泌水平，确认成纤维细胞功能表型。

产品名称：兔肺动脉成纤维细胞

英文名称： Rabbit Pulmonary Artery Fibroblasts

组织来源： 肺大动脉组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔肺动脉成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔肺动脉成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 兔肺动脉成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔肺动脉成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

显微镜确认细胞汇合 80‑85%，吸弃旧培养基。

PBS 清洗贴壁成纤维细胞 2 次，吸净 PBS 废液。

胰酶‑EDTA 消化液加入瓶内，37℃孵育 3‑4min，细胞收缩。

兔肺动脉成纤维细胞完全培养基终止消化，吹打得到悬液。

悬液转移离心管，1000r/min 离心 5min，弃上清。

肺动脉成纤维专用培养基重悬沉淀，分瓶接种。

37℃、5% CO₂培养箱孵育，24h 观察贴壁，2‑3 天换液。

1.取材时需迅速分离目标血管组织，用含肝素的PBS冲洗管腔去除残留血液，整个过程控制在15分钟以内。

2.使用纤维连接蛋白(10ug/ml)包被培养器皿可显著改善内皮细胞贴壁速度和铺展形态。

3.培养过程中需注意CO2浓度维持在5%正负0.5%，pH值保持在7.2-7.4范围内。

4.在基础培养基中补充20%胎牛血清、10ng/ml EGF和2ug/ml肝素钠，可维持内皮细胞表型稳定。

5.培养期间每48小时换液一次，观察细胞融合情况，融合度达90%以上时进行传代处理。