兔肺大静脉平滑肌细胞

兔肺大静脉平滑肌细胞

采用组织块贴壁法从新西兰大白兔的肺大静脉平滑肌细胞来源组织中分离原代细胞，经胰蛋白酶消化传代后，接种于明胶包被的培养皿中，使用 DMEM/F12 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL PDGF-BB）培养；通过免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）及 h-caldesmon 等平滑肌特异性标志物，结合细胞形态学观察（梭形、蜂房样排列）确认平滑肌细胞身份。

产品名称：兔肺大静脉平滑肌细胞

英文名称： Rabbit Pulmonary Great Vein Smooth Muscle Cells

组织来源： 肺大静脉组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔肺大静脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔肺大静脉平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 兔肺大静脉平滑肌细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔肺大静脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

镜检细胞汇合 80‑85%，吸出瓶内旧培养液。

PBS 缓冲液洗涤平滑肌细胞 2 次，吸除全部 PBS。

胰酶‑EDTA 消化液加入瓶底，37℃孵育 3‑5min，镜下细胞回缩。

兔肺大静脉平滑肌完全培养基终止消化，吹打制备悬液。

悬液转入离心管，1000rpm 离心 5min，舍弃上清。

平滑肌完全培养基重悬沉淀，分瓶接种传代。

37℃、5% CO₂培养箱培养，次日观察贴壁，2‑3 天更换培养基。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。