产品名称 | 兔大隐静脉内皮细胞 | 组织来源 | 大隐静脉组织 |
英文名称 | Rabbit Great Saphenous Vein Endothelial Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3644 |
方法简介 实验室分离的兔大隐静脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔大隐静脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 兔大隐静脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： Accutase消化液或0.25%胰蛋白酶
兔大隐静脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，每只可获得2-5x10^5个内皮细胞，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、兔抗细胞CD31抗体(用于流式分选)、ECM基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标血管/组织，用预冷PBS冲洗去除血液，仔细分离去除外膜和脂肪组织
将组织剪碎后加入0.25%胰蛋白酶，37度消化15-20分钟，收集消化液
再加入II型胶原酶，37度振荡消化45-60分钟，充分分散组织
消化液经70um和40um滤网依次过滤，300g离心10分钟收集细胞
用含CD31抗体的磁珠进行阳性/阴性分选，或采用差速贴壁法去除成纤维细胞，收集CD31+内皮细胞
原代培养要点
将纯化后的内皮细胞接种于明胶预包被的培养皿中，使用ECM基质胶包被可显著提高贴壁率
接种密度建议3x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养，内皮细胞通常24-72小时贴壁
使用内皮细胞专用培养基(含20%FBS、EGF 5ng/mL、FGF 2ng/mL、肝素10ug/mL)
每2-3天换液一次，细胞融合至80-90%时可用0.05%胰蛋白酶-EDTA传代
常见问题优化
内皮细胞被成纤维细胞污染：采用差速贴壁法2-3次，或CD31磁珠分选提高纯度
内皮细胞凋亡：培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632(10uM)可显著提高存活率
表达内皮标志物下降：传代次数控制在3代以内，冻存早期细胞以备后续使用
大鼠可溶性血栓调节蛋白(s-TM)elisa试剂盒 | Pt-K2袋鼠肾细胞 |
大鼠干扰素基因刺激蛋白(STING)elisa试剂盒 | 小鼠视网膜微血管内皮细胞 |
大鼠可溶性转铁蛋白受体(sTfR)elisa试剂盒 | 小鼠小胶质细胞 |
大鼠信号传导转录激活因子5(STAT5)elisa试剂盒 | RTE (大鼠气管上皮细胞) |
大鼠PKA-Cα(PKA-Cα)elisa试剂盒 | 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)PC-12(高分化)（种属鉴定） |
大鼠PP2A癌症抑制抑制因子(CIP2A)elisa试剂盒 | 小鼠毛囊干细胞 |
猪去唾液酸糖蛋白受体2（ASGR2）elisa试剂盒 | 人原代神经干细胞 |
VCAP人前列腺癌细胞专用培养基 | GK2基因过表达细胞株 |
PK-15猪肾细胞专用培养基 | ADAL基因过表达细胞株 |
人原代外周血巨噬细胞专用培养基 | CCDC63基因过表达细胞株 |
HEY细胞专用培养基 | JPH2基因过表达细胞株 |
大鼠原代下颌骨细胞专用培养基 | CHRDL1基因过表达细胞株 |
兔大隐静脉内皮细胞大鼠原代食管平滑肌细胞专用培养基 | ACSM5基因过表达细胞株 |
HL-1细胞专用培养基 | RBAK基因过表达细胞株 |
镜下确认细胞汇合 80‑85%，吸除培养瓶旧培养液。
无菌 PBS 冲洗内皮细胞层 2 次，吸走全部 PBS 废液。
内皮消化液覆盖细胞底面，37℃孵育 3‑5min，细胞变圆松动。
兔大隐静脉内皮完全培养基终止消化，轻柔吹打收获悬液。
悬液转移离心管，1000rpm 离心 5min，弃上清。
大隐静脉内皮专用培养基重悬沉淀，分瓶接种。
37℃、5% CO₂培养箱孵育，24h 观察贴壁，2‑3 天换液。
