产品名称 | 兔肠微血管内皮细胞 | 组织来源 | 全肠组织 |
英文名称 | Rabbit Intestinal Microvascular Endothelial Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3665 |
方法简介 实验室分离的兔肠微血管内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔肠微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 兔肠微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： Accutase消化液或0.25%胰蛋白酶
兔肠微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，每只可获得2-5x10^5个内皮细胞，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、兔抗细胞CD31抗体(用于流式分选)、ECM基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标血管/组织，用预冷PBS冲洗去除血液，仔细分离去除外膜和脂肪组织
将组织剪碎后加入0.25%胰蛋白酶，37度消化15-20分钟，收集消化液
再加入II型胶原酶，37度振荡消化45-60分钟，充分分散组织
消化液经70um和40um滤网依次过滤，300g离心10分钟收集细胞
用含CD31抗体的磁珠进行阳性/阴性分选，或采用差速贴壁法去除成纤维细胞，收集CD31+内皮细胞
原代培养要点
将纯化后的内皮细胞接种于明胶预包被的培养皿中，使用ECM基质胶包被可显著提高贴壁率
接种密度建议3x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养，内皮细胞通常24-72小时贴壁
使用内皮细胞专用培养基(含20%FBS、EGF 5ng/mL、FGF 2ng/mL、肝素10ug/mL)
每2-3天换液一次，细胞融合至80-90%时可用0.05%胰蛋白酶-EDTA传代
常见问题优化
内皮细胞被成纤维细胞污染：采用差速贴壁法2-3次，或CD31磁珠分选提高纯度
内皮细胞凋亡：培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632(10uM)可显著提高存活率
表达内皮标志物下降：传代次数控制在3代以内，冻存早期细胞以备后续使用
大鼠可溶性肿瘤坏死因子受体2(sTNFR2)elisa试剂盒 | KNRK大鼠正常肾细胞 |
大鼠可溶性Toll样受体6(sTLR6)elisa试剂盒 | 小鼠结膜成纤维细胞 |
大鼠干扰素基因刺激蛋白(STING)elisa试剂盒 | 小鼠海马神经元细胞 |
大鼠可溶性转铁蛋白(sTf)elisa试剂盒 | RIN-m5F (大鼠胰岛β细胞瘤细胞) |
大鼠P-CREB(P-CREB)elisa试剂盒 | 小鼠乳腺肿瘤细胞C127（种属鉴定） |
大鼠PKA-Cα(PKA-Cα)elisa试剂盒 | 鸡真皮成纤维细胞 |
猪醛固酮（ALD）elisa试剂盒 | 小鼠原代耳软骨细胞 |
UM-UC-3人膀胱移行癌细胞专用培养基 | CABP1基因过表达细胞株 |
PK-13猪肾系细胞专用培养基 | GAB4基因过表达细胞株 |
人原代腹膜间皮细胞专用培养基 | CNST基因过表达细胞株 |
HET-1A细胞专用培养基 | CPA6基因过表达细胞株 |
大鼠原代纤维环细胞专用培养基 | ARC基因过表达细胞株 |
兔肠微血管内皮细胞大鼠原代肾足细胞专用培养基 | CLNK基因过表达细胞株 |
HK-2细胞专用培养基 | DCST1基因过表达细胞株 |
镜检细胞汇合 80‑85%，吸出瓶中旧培养基。
PBS 洗涤微血管内皮细胞层 2 次，吸除 PBS 废液。
内皮消化液铺满瓶底，37℃孵育 3‑5min，镜下细胞变圆松动。
兔肠微血管内皮完全培养基终止消化，吹打得到细胞悬液。
悬液转移离心管，1000rpm 离心 5min，弃上清。
微血管内皮专用培养基重悬沉淀，分瓶接种。
37℃、5% CO₂培养箱静置，24h 观察贴壁，2‑3 天换液。
