产品名称 | 兔肠黏膜上皮细胞 | 组织来源 | 全肠组织 |
英文名称 | Rabbit Intestinal Mucosal Epithelial Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3649 |
方法简介 实验室分离的兔肠黏膜上皮细胞采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔肠黏膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔肠黏膜上皮细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、Hydrocortisone、肾上腺素、甲状腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔肠黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠可溶性肿瘤坏死因子α(sTNF-α)elisa试剂盒 | INS-1大鼠胰岛细胞 |
大鼠可溶性血栓调节蛋白(s-TM)elisa试剂盒 | 小鼠视网膜色素上皮细胞 |
大鼠可溶性Toll样受体2(sTLR2)elisa试剂盒 | 小鼠脑膜细胞 |
大鼠可溶性转铁蛋白受体(sTfR)elisa试剂盒 | PC-12 (未分化) (大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化)) (种属鉴定正确) |
大鼠p-Bad(S136)elisa试剂盒 | 人肺腺癌细胞ABC-1(STR鉴定正确) |
大鼠PHD指蛋白8(PHF8)elisa试剂盒 | 人神经干细胞 |
猪醛糖还原酶（AR）elisa试剂盒 | 兔原代肠肌成纤维细胞 |
UM-UC-3人膀胱移行癌细胞专用培养基 | CAMK1G基因过表达细胞株 |
3D4/21猪肺泡巨噬细胞专用培养基 | ACTL6B基因过表达细胞株 |
小鼠原代肛门内括约肌平滑肌细胞专用培养基 | MED25基因过表达细胞株 |
HepG2细胞专用培养基 | DNAJC22基因过表达细胞株 |
大鼠原代小肠成纤维细胞专用培养基 | TNFAIP3基因过表达细胞株 |
兔肠黏膜上皮细胞大鼠原代肾周细胞专用培养基 | ADPRHL1基因过表达细胞株 |
HGC-27细胞专用培养基 | EDAR基因过表达细胞株 |
显微镜确认细胞汇合 75‑80%，吸去旧培养基，上皮不可过密。
PBS 缓冲液轻柔冲洗细胞层 2 次，吸净 PBS。
肠黏膜上皮消化液加入，37℃消化 4‑7min，镜检细胞收缩离散。
兔肠黏膜上皮完全培养基终止消化，温和吹打制备悬液。
悬液转入离心管，900r/min 离心 5min，弃上清。
肠黏膜上皮完全培养基重悬沉淀，按密度接种。
37℃、5% CO₂培养箱培养，48h 观察贴壁，2‑3 天更换培养基。
