兔背根神经元细胞

兔背根神经元细胞

运用胶原酶 IV 和 Dispase 联合消化法从新西兰大白兔背根神经元细胞神经组织中分离神经元前体细胞，经密度梯度离心纯化后接种于 PLL 包被的培养皿中，采用含 B-27 supplement、NGF（10 ng/mL）和 bFGF（5 ng/mL）的 Neurobasal 完全培养基培养；通过免疫荧光双标检测 β-III-tubulin/Map2 共表达，免疫细胞化学染色显示突触蛋白（Synaptophysin）阳性，并经钙成像实验检测神经元电生理活性。

产品名称：兔背根神经元细胞

英文名称： Rabbit Dorsal Root Ganglion Neurons

组织来源： 脊髓组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔背根神经元细胞采用胶原酶-胰酶联合消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔背根神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 兔背根神经元细胞完全培养基(基础培养基，含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 神经元细胞样

传代比例： 不传代

传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液： 0.125%胰蛋白酶

兔背根神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

镜下观察细胞生长状态，汇合达到 70‑75%，小心吸弃旧神经元培养基。

PBS 轻柔漂洗细胞层 1‑2 次，动作要轻，神经元附着力弱，吸去 PBS。

温和神经元消化液处理，37℃孵育 5‑8min，镜下细胞开始离散。

神经元完全培养基终止消化，极轻柔吹打，减少神经元机械损伤。

细胞悬液转移离心管，800r/min 低速离心 6min，弃上清。

兔背根神经元专用培养基重悬沉淀，低损伤分装接种。

37℃、5% CO₂培养箱培养，48h 观察突起生长，半量换液每 2‑3 天。

1.取材时需迅速分离目标血管组织，用含肝素的PBS冲洗管腔去除残留血液，整个过程控制在15分钟以内。

2.培养板需提前用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，未包被表面内皮细胞贴壁效率极低且形态不规则。

3.该细胞体外可传10-15代，建议采用低代次细胞进行实验，高代次细胞可能出现表型漂移和凝集素摄取能力下降。

4.在基础培养基中补充20%胎牛血清、10ng/ml EGF和2ug/ml肝素钠，可维持内皮细胞表型稳定。

5.换液时每2天更换一次新鲜培养基，换液时动作轻柔避免冲刷已贴壁的内皮细胞单层。