人主动脉平滑肌细胞

人主动脉平滑肌细胞

采用组织块贴壁法从健康供体的主动脉平滑肌细胞来源组织中分离原代细胞，经胰蛋白酶消化传代后，接种于明胶包被的培养皿中，使用 DMEM/F12 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL PDGF-BB）培养；通过免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）及 h-caldesmon 等平滑肌特异性标志物，结合细胞形态学观察（梭形、蜂房样排列）确认平滑肌细胞身份。

产品名称：人主动脉平滑肌细胞

英文名称： Human Aortic Smooth Muscle Cells

组织来源： 胸主动脉组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人主动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的人主动脉平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人主动脉平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人主动脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存管 37℃水浴快速融解，仅剩微量冰晶取出。

酒精消毒管壁，超净台转移细胞悬液到离心管。

1000rpm 离心 5min，弃上清废液。

主动脉平滑肌细胞完全培养基吹打重悬沉淀。

细胞计数，标准密度接种培养瓶，十字混匀。

37℃、5% CO₂培养箱静置，24h 观察贴壁。

汇合 75‑85% 更换新鲜完全培养基，开展传代操作。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.使用人源组织标本需获得伦理委员会批准及患者知情同意，操作需符合生物安全规范。 细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。