人直肠平滑肌细胞

人直肠平滑肌细胞

基于酶消化-差速贴壁联合策略从健康供体直肠平滑肌细胞组织获取平滑肌细胞，经 0.1% 胶原酶 IV 消化 2h 后通过 30% 胎牛血清梯度贴壁纯化，接种于纤连蛋白包被培养皿中，使用 DMEM 高糖培养基（含 15% FBS、10 ng/mL EGF 及 50 μg/mL 抗坏血酸）培养；通过免疫荧光双标检测 α-SMA/SM-MHC 共表达，RT-qPCR 分析平滑肌分化标志基因转录水平，并观察细胞在收缩刺激下的形态变化。

产品名称：人直肠平滑肌细胞

英文名称： Human Rectal Smooth Muscle Cells

组织来源： 直肠组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人直肠平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的人直肠平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人直肠平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人直肠平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存管 37℃水浴快速解冻，微量冰晶残余取出。

酒精消毒管壁，超净台将细胞悬液转移离心管。

1000rpm 离心 5min，弃上清废液。

直肠平滑肌细胞完全培养基吹打重悬细胞沉淀。

细胞计数，接种培养瓶，十字晃动混匀。

37℃、5% CO₂培养箱静置，24h 观察贴壁。

汇合 75‑85% 弃旧培养基，更换新鲜培养基，准备传代。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.常规培养皿经PBS冲洗后即可使用，平滑肌细胞具有较强的自主贴壁能力。

3.平滑肌细胞增殖速度中等，约3-4天换液一次，融合后呈峰谷状排列(蜂窝样)为典型特征。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.换液时弃去旧培养基后用PBS轻柔洗涤一次再加入新鲜培养基，可减少代谢废物积累。