人口腔角质形成细胞-癌前病变DOK-英压转染HPV16E6/E7基因

人口腔角质形成细胞-癌前病变DOK-英压转染HPV16E6/E7基因说明书

1. 产品基本信息

产品名称：人口腔角质形成细胞-癌前病变DOK-英压转染HPV16E6/E7基因

货号：A01X6266

组织来源：人正常口腔黏膜（牙龈 / 颊黏膜）

产品规格：1*106

细胞形态：上皮样、多角形，铺路石样

生长特性：贴壁生长

分离方法：组织机械分离 + 胶原酶消化法，上皮选择性培养纯化

鉴定：PCK（细胞角蛋白）免疫荧光鉴定，纯度≥90%

微生物检测：细菌、真菌、支原体阴性；HIV‑1、HBV、HCV 阴性

2. 推荐培养条件

• 培养环境：37 ℃，5% CO₂，95% 空气，饱和湿度

• 包被：培养器皿建议用 Ⅰ 型鼠尾胶原包被（2–5 μg/cm²），利于贴壁

• 培养基：人口腔角质形成细胞专用上皮完全培养基

• 换液频率：每 2～3 天换液一次

• 传代密度：汇合度 80%–90% 传代；传代比例推荐 1:2；原代细胞仅建议使用 2–3 代，多次传代会发生分化、增殖能力下降

• 消化液：0.25% 胰蛋白酶‑0.02% EDTA

3. 储存与运输

1. 复苏活细胞（T25 瓶）：常温保温运输；收到后立即放入 37℃ CO₂培养箱静置。

2. 冻存细胞：液氮气相（≤−130 ℃）长期保存；干冰运输。

❗冻存细胞收到后需尽快复苏，禁止在−20℃存放。

4. 细胞复苏操作

1. 提前预热完全培养基；胶原包被培养瓶备用。

2. 取出冻存管，37 ℃水浴快速融化（1 min 内，留少量冰晶）。

3. 无菌条件下将细胞悬液移入含完全培养基离心管，1000 rpm，5 min 离心。

4. 弃上清，新鲜完全培养基轻柔重悬，接种至 T25 瓶，置于培养箱。

5. 次日观察贴壁情况，更换新鲜培养基去除死细胞。

5. 细胞传代操作

1. 吸除旧培养基，无菌 PBS 洗涤细胞 2 次。

2. 加入胰酶‑EDTA，37 ℃消化 1–3 min；镜下观察大部分细胞变圆、间隙增大，立即加入完全培养基终止消化。

3. 轻柔吹打收集细胞悬液，1000 rpm 离心 5 min，弃上清。

4. 新鲜培养基重悬，按 1:2 比例接种至胶原包被新培养瓶，继续培养。

6. 应用范围

• 口腔黏膜上皮生物学、上皮分化机制研究

• 口腔创伤愈合、黏膜屏障模型构建

• 牙周病、口腔黏膜病体外细胞模型

• 口腔药物、生物材料细胞毒性、刺激性评价

• 3D 口腔上皮类器官 / 气液界面培养模型构建

7. 注意事项与警告

1. 仅限科研用途，严禁用于人体移植、临床治疗、体外诊断。

2. 人源细胞存在潜在生物风险，全程在BSL‑2 生物安全柜操作，佩戴个人防护；废液、耗材按生物废弃物灭活处理。

3. 原代口腔角质形成细胞体外增殖寿命有限，超过 P3 代后增殖减弱、自发分化，不建议继续实验。

4. 培养基建议使用上皮专用培养基；普通含高钙 DMEM 易诱导角质形成细胞提前分化。

5. 细胞不要过度消化，胰酶消化时间过长会严重损伤细胞活力。

6. 收到细胞请 24 h 内反馈状态；超过时限视为细胞状态正常。

7. 请勿反复冻存复苏，一次复苏用完。

8. 质量保证

• 细胞活力：复苏存活率≥85%

• 细胞纯度：PCK 阳性≥90%

• 微生物：支原体、细菌、真菌阴性；血源病毒阴性

• 配套 COA 检验报告随货提供（批次专属）