产品名称 | 人小气道上皮细胞 | 组织来源 | 支气管末端组织 |
英文名称 | Human Small Airway Epithelial Cells | 种属 | 人 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2725 |
方法简介 实验室分离的人小气道上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的人小气道上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 人小气道上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人小气道上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：健康成人供体，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、I/II型胶原酶、DNase I、M199培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠TAU-181蛋白(TAU-181)elisa试剂盒 | SW982 [SW-982]人滑膜肉瘤细胞 |
大鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP)elisa试剂盒 | 小鼠结肠粘膜上皮细胞 |
大鼠转醛缩酶(TALDO1)elisa试剂盒 | 小鼠股动脉内皮细胞 |
大鼠纤溶抑制因子;凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)elisa试剂盒 | BC3H1 (小鼠脑瘤细胞) |
大鼠Nogo66受体(NgR)elisa试剂盒 | 人横纹肌肉瘤细胞A-673(STR鉴定正确) |
大鼠Notch配体(NotchL)elisa试剂盒 | 小鼠卵巢表面上皮细胞 |
猪神经生长因子（NGF）elisa试剂盒 | 鸡睾丸支持细胞 |
SIHa人子宫颈鳞癌细胞专用培养基 | AK8基因过表达细胞株 |
PC12低分化+GFP大鼠肾上腺嗜铬瘤低分化+GFP细胞专用培养基 | ATAD3C基因过表达细胞株 |
人原代胃平滑肌细胞专用培养基 | MAMDC2基因过表达细胞株 |
HCC1806细胞专用培养基 | AGXT2基因过表达细胞株 |
大鼠原代支气管上皮细胞专用培养基 | CSTF2T基因过表达细胞株 |
人小气道上皮细胞大鼠原代皮肤成纤维细胞专用培养基 | CRISPLD1基因过表达细胞株 |
HCC827+luc细胞专用培养基 | KIF2B基因过表达细胞株 |
冻存管 37℃水浴速融，留有极少量冰晶即取出。
管壁酒精消毒，超净台将细胞悬液转移入无菌离心管。
1000rpm，5min 离心，弃上清。
添加小气道上皮细胞专用上皮完全培养基，轻柔吹打重悬。
细胞计数，按推荐密度接种，上皮细胞避免接种过稀。
置于 37℃、5% CO₂培养箱静置培养，24h 镜检贴壁形态。
每 48h 更换新鲜预热完全培养基，汇合 80% 进行传代，不允许细胞完全长满。
