人小气道平滑肌细胞

人小气道平滑肌细胞

基于酶消化-差速贴壁联合策略从健康供体小气道平滑肌细胞组织获取平滑肌细胞，经 0.1% 胶原酶 IV 消化 2h 后通过 30% 胎牛血清梯度贴壁纯化，接种于纤连蛋白包被培养皿中，使用 DMEM 高糖培养基（含 15% FBS、10 ng/mL EGF 及 50 μg/mL 抗坏血酸）培养；通过免疫荧光双标检测 α-SMA/SM-MHC 共表达，RT-qPCR 分析平滑肌分化标志基因转录水平，并观察细胞在收缩刺激下的形态变化。

产品名称：人小气道平滑肌细胞

英文名称： Human Small Airway Smooth Muscle Cells

组织来源： 支气管末端组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人小气道平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的人小气道平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人小气道平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人小气道平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存细胞 37℃水浴快速融解，冰晶几乎消失马上拿出冻存管。

酒精擦拭外壁，超净台内把细胞悬液转移至含基础培养基离心管。

1000rpm 离心 5min，去除上清液。

加入小气道平滑肌细胞完全培养基，温和吹打重悬细胞沉淀。

细胞计数，按标准密度接种至培养瓶，十字摇匀使细胞分布均匀。

放置 37℃、5% CO₂培养箱静置培养，24h 观察贴壁。

细胞汇合 75‑85%，去除旧培养基，更换预热完全培养基，准备后续传代实验。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.使用未包被的常规培养瓶即可，成纤维细胞贴壁能力强，一般在24小时内即可见细胞从组织块边缘迁出。

3.该细胞增殖迅速，原代培养2-3周可获得足够细胞，传代后可维持培养15-20代左右。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.换液时每2-3天更换一次新鲜培养基，成纤维细胞代谢旺盛需及时补充营养和清除代谢产物。