人小肠平滑肌细胞

人小肠平滑肌细胞

运用胶原酶消化法从健康供体小肠平滑肌细胞血管组织中分离平滑肌细胞，经密度梯度离心纯化后接种于胶原 I 包被的培养表面，采用含有 10% FBS 和 5 ng/mL PDGF-BB 的 DMEM/F12 培养基进行体外扩增；通过 Western blot 和免疫荧光双重检测 α-SMA、SM22α、Calponin 及 SM-MHC 表达，并通过细胞迁移实验（Transwell）和收缩功能实验验证平滑肌细胞收缩表型。

产品名称：人小肠平滑肌细胞

英文名称： Human Small Intestinal Smooth Muscle Cells

组织来源： 小肠组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人小肠平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的人小肠平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人小肠平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人小肠平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存管取出，37℃水浴快速复融，酒精消毒管壁，送入超净台。

细胞悬液转移离心管，小肠平滑肌细胞完全培养基稀释冻存液。

1200rpm 离心 5min，弃上清，保留管底细胞沉淀。

加入平滑肌完全培养基，轻柔吹打重悬细胞。

细胞计数，调整接种密度，接种培养容器。

37℃，5% CO₂培养箱静置孵育。

24‑48h 镜检贴壁，更换培养基，汇合 75‑85% 传代。

1.手术取脑过程中需严格无菌操作，迅速分离目标脑区组织并置于预冷的无钙镁PBS中，30分钟内完成组织清洗与精细解剖。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.该细胞类型体外寿命有限，分离后需尽快进行实验分析，超过10天培养后大部分神经元会出现退行性改变。

4.在基础培养基中添加NGF(100ng/ml)、BDNF(20ng/ml)及GDNF(10ng/ml)三种神经营养因子，可显著提高神经元存活率。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。