人外周血淋巴细胞

人外周血淋巴细胞

采用密度梯度离心法从健康供体的外周血淋巴细胞来源血液或组织中分离免疫细胞，经 NH₄Cl 裂解红细胞后，接种于未包被培养皿中，使用 RPMI-1640 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL M-CSF/G-CSF）培养；通过流式细胞术检测 CD11b、F4/80（大鼠）、CD14、CD86 等巨噬细胞/免疫细胞标志物表达，结合 MTT 增殖实验和吞噬功能实验（荧光微球吞噬 assay）验证免疫细胞活性与功能。

产品名称：人外周血淋巴细胞

英文名称： Human Peripheral Blood Lymphocytes

组织来源： 外周血

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人外周血淋巴细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来。

质量检测  实验室分离的人外周血淋巴细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人外周血淋巴细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 悬浮

细胞形态： 圆形

传代比例： 不传代

传代特性： 不增殖；不传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人外周血淋巴细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存管取出，37℃水浴快速复融，75% 酒精消毒管壁，送入超净台。

细胞悬液转移离心管，淋巴细胞完全培养基稀释冻存保护剂。

1200rpm 离心 5min，弃上清，保留悬浮细胞沉淀。

加入完全培养基，轻柔吹打重悬细胞。

细胞计数，调节细胞浓度，悬浮接种培养瓶。

37℃、5% CO₂培养箱悬浮培养。

24h 镜检活力，半量换液，需要刺激活化时加入对应刺激因子。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。