人外周血白细胞

人外周血白细胞

从健康供体外周血白细胞组织标本经机械研磨与胶原酶消化获取单细胞悬液，通过 Ficoll-Paque 密度梯度离心分离淋巴细胞层，经红细胞裂解液处理后再悬浮于含 10% FBS 的 RPMI-1640 培养基中，添加特异性细胞因子（如 IL-2 维持 T 细胞活性、IL-4 诱导 M2 极化）进行体外培养；通过免疫荧光染色检测 CD68、CD163（巨噬细胞极化标志）、CD3/CD4/CD8（T细胞标志）表达，并经功能实验（细胞毒性 assay、cytokine release assay）验证免疫应答功能⁠

产品名称：人外周血白细胞

英文名称： Human Peripheral Blood Leukocytes

组织来源： 外周血

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人外周血白细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来。

质量检测  实验室分离的人外周血白细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人外周血白细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 悬浮

细胞形态： 圆形

传代比例： 不传代

传代特性： 不增殖；不传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人外周血白细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存管取出，37℃水浴快速复融，酒精消毒冻存管外壁，转入超净台。

细胞悬液转移离心管，淋巴细胞专用完全培养基缓慢稀释冻存液。

1000‑1200rpm 离心 5min，弃上清，保留细胞沉淀，悬浮细胞注意操作轻柔。

加入悬浮细胞完全培养基，轻柔吹打重悬细胞沉淀，不要求贴壁。

细胞计数，调整细胞密度，接种悬浮培养瓶。

37℃、5% CO₂培养箱静置悬浮培养。

24h 镜检细胞活力，半量更换新鲜培养基，依据细胞增殖进行分瓶扩增。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。