人肾小球内皮细胞

人肾小球内皮细胞

从健康供体肾小球内皮细胞组织标本经胶原酶-弹性蛋白酶联合消化获取单细胞悬液，通过 Percoll 密度梯度离心纯化内皮细胞组分，接种于纤维连接蛋白预包被的培养皿中，使用内皮基础培养基 supplemented with 多种生长因子（VEGF、FGF-2、IGF-1 及 Ascorbic acid）维持培养；通过免疫荧光染色显示 CD31 膜染色阳性、vWF 胞质颗粒状表达，并结合乙酰化 LDL 荧光摄取实验和内皮管腔形成 assay 综合鉴定。

产品名称：人肾小球内皮细胞

英文名称： Human Glomerular Endothelial Cells

组织来源： 肾组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人肾小球内皮细胞采用先机械研磨过不锈钢网筛分离得到肾小球、后用胶原酶消化，结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人肾小球内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 人肾小球内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： Accutase消化液或0.25%胰蛋白酶

人肾小球内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存细胞取出，37℃水浴快速解冻，酒精消毒冻存管外壁。

超净台转移细胞悬液至离心管，加入内皮细胞专用完全培养基稀释冻存保护剂。

1200rpm 离心 5min，弃上清，留存细胞沉淀。

加入内皮完全培养基，温和吹打重悬细胞沉淀。

细胞计数，调整密度，接种于明胶包被培养器皿，内皮细胞依赖包被。

37℃、5% CO₂培养箱静置孵育，避免频繁开关箱门。

24h 观察贴壁，换液去除悬浮死细胞，汇合度 80% 以内传代，内皮细胞不可长到满板。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。