人肾皮质上皮细胞

人肾皮质上皮细胞

利用胶原酶 IV 和透明质酸酶联合消化法从健康供体靶组织中分离肾皮质上皮细胞，经 Percoll 梯度离心去除杂细胞后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、EGF 5 ng/mL 及胰岛素）进行体外扩增；通过流式细胞术检测上皮特异性抗原（ESA）、CD326 表达率，免疫细胞化学染色显示细胞骨架波形蛋白（Vimentin）阴性、细胞角蛋白阳性，并经功能实验验证其屏障功能完整性。

产品名称：人肾皮质上皮细胞

英文名称： Human Renal Cortical Epithelial Cells

组织来源： 肾组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人肾皮质上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人肾皮质上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人肾皮质上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人肾皮质上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

取出冻存细胞，37℃水浴快速复融，冻存管外壁酒精消毒后移入超净工作台。

将细胞悬液转移离心管，加入足量预热专用完全培养基稀释冻存保护剂。

1000‑1200rpm 离心 5min，小心吸弃全部上清液，保留底部细胞沉淀。

加入人肾皮质上皮细胞完全培养基，温和吹打重悬，打散细胞团块，禁止暴力吹打。

细胞计数，配置目标接种浓度，接种于胶原包被的培养瓶，上皮细胞建议包被处理提升贴壁。

放入 37℃、5% CO₂培养箱静置孵育，不挪动培养瓶，让细胞充分贴壁。

培养 24h 镜检贴壁，更换培养基清除悬浮死细胞，细胞汇合度 70‑80% 开展传代操作。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。