人肾癌组织源细胞

人肾癌组织源细胞

运用酶消化-密度梯度离心联合法从健康供体手术切除的肿瘤组织中分离原代癌细胞，经胶原酶 I/II 和 Dispase 联合消化后通过 30%-50% 连续 Percoll 梯度离心富集肿瘤细胞，接种于 Matrigel 预包被的培养皿中使用肿瘤专用培养基（含 10% FBS、EGF 20 ng/mL、bFGF 5 ng/mL 及 Hydrocortisone）培养；通过免疫荧光检测上皮-间质转化（EMT）标志物 E-cadherin/Vimentin 表达转换、CK5/6 及 p63 等癌细胞标志物

产品名称：人肾癌组织源细胞

英文名称： Human Renal Cancer Tissue-Derived Cells

组织来源： 肾癌组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的癌组织源细胞采用胶原酶消化、经Percoll离心纯化制备而来。

质量检测  实验室分离的人肾癌组织源细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人肾癌组织源细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人肾癌组织源细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存管 37℃水浴快速解冻，留有少量冰晶取出，酒精消毒外壁。

超净台中将细胞悬液移入离心管，肾癌组织源细胞完全培养基稀释。

1000rpm 离心 5min，弃上清去除冻存保护剂。

加入专用培养基温和吹打重悬，保护细胞与微小组织碎片。

细胞计数，调节接种密度接种培养瓶。

37℃、5% CO₂培养箱静置 48h，不挪动培养瓶。

半换液清除漂浮死碎片，镜检细胞迁出贴壁，跟踪增殖情况。

1.血管组织取材后需立即置于冰预冷的M199培养基中运输，尽快去除外膜结缔组织和脂肪组织。

2.使用纤维连接蛋白(10ug/ml)包被培养器皿可显著改善内皮细胞贴壁速度和铺展形态。

3.部分细胞类型需要特定的细胞外基质包被才能正常贴壁和发挥功能，需提前优化条件。

4.培养基中需添加10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和10ug/ml肝素，促进内皮细胞增殖并维持表型。

5.换液前预先检查培养基pH和颜色，若培养基过早变黄提示需缩短换液间隔至24小时。