人乳腺成纤维细胞

人乳腺成纤维细胞

从健康供体乳腺成纤维细胞组织标本经机械分离与胶原酶 II 联合消化获取成纤维细胞，经差速贴壁法纯化后接种于纤维连接蛋白包被培养皿中，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、2 mM L-谷氨酰胺及 1% 非必需氨基酸）维持培养；通过免疫荧光检测 FSP-1/S100A4、α-SMA（活化型）及 PDGFR-β 表达，Western blot 分析细胞外基质蛋白（胶原 I、纤连蛋白）分泌水平，确认成纤维细胞功能表型。

产品名称：人乳腺成纤维细胞

英文名称： Human Mammary Fibroblasts

组织来源： 乳腺组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人乳腺成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的人乳腺成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人乳腺成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人乳腺成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存管 37℃水浴速融，少量冰晶残留取出，75% 酒精擦拭管壁。

超净台将细胞悬液转移离心管，加入乳腺成纤维细胞完全培养基。

1000rpm 离心 5min，弃上清。

完全培养基轻柔吹打重悬细胞沉淀。

计数细胞，调整接种密度接种培养瓶。

37℃、5% CO₂培养箱静置孵育 24h。

镜检贴壁，更换培养基去除悬浮死细胞，常规维持培养。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。