人脐静脉血来源内皮祖细胞

人脐静脉血来源内皮祖细胞

运用组织块贴壁-酶消化联合法分离健康供体脐静脉血来源内皮祖细胞，经密度梯度离心纯化内皮祖细胞后接种于明胶包被培养表面，采用含有血管内皮生长因子（VEGF 20 ng/mL）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF 5 ng/mL）和肝素（5 μg/mL）的 MCDB-131 培养基培养；通过免疫荧光检测 CD31、CD146、eNOS 表达，流式细胞术分析 CD31+/CD146+ 双阳性细胞比例，并经管状结构形成实验验证内皮细胞功能特性。

产品名称：人脐静脉血来源内皮祖细胞

英文名称： Human Tracheal Smooth Muscle Cells

组织来源： 气管组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人气管平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合组织贴块法制备而来。

质量检测  实验室分离的人气管平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人气管平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人气管平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

静脉血单核细胞分离：采集脐静脉血，密度梯度离心分离单个核细胞，去除红细胞与杂质细胞。

特异性包被接种：采用明胶包被培养板，提升内皮祖细胞特异性贴壁率，减少杂细胞粘附。

血管因子诱导：添加含bFGF、VEGF双因子的诱导培养基，定向诱导祖细胞向内皮谱系分化。

阶段性换液筛选：培养前3天不换液，保障细胞定植，3天后每日半量换液，筛选活性细胞。

单克隆扩增：挑选形态均一的梭形祖细胞克隆，单独转接扩增，提升细胞纯度。

血管功能检测：通过小管形成、迁移实验验证细胞血管修复与生成功能。

低代稳定冻存：4代以内高功能细胞梯度冻存，保留细胞内皮分化与修复活性。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。