人脐静脉内皮细胞

人脐静脉内皮细胞

采用胶原酶 II 消化法从健康供体的脐静脉内皮细胞来源血管组织中分离内皮细胞，经预纯化（低贴壁培养去除成纤维细胞）后，接种于胶原 I 包被的培养皿中，使用 EGM-2 内皮专用培养基（含 VEGF、bFGF、EGF 及肝素）培养；通过免疫荧光染色检测 CD31（PECAM-1）、VE-cadherin、vWF 及 CD34 等内皮标志物，结合 Dil-acLDL 摄取实验和 CD31/VE-cadherin 双标免疫荧光确认内皮细胞身份与纯度。

产品名称：人脐静脉内皮细胞

英文名称： Human Umbilical Vein Endothelial Cells

组织来源： 脐带组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 人脐静脉内皮细胞（HUVEC）完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代左右；3代以内状态最佳

消化液： Accutase消化液或0.25%胰蛋白酶

人脐静脉内皮细胞（HUVEC）体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

脐静脉预处理：新鲜脐静脉无菌冲洗内腔，去除残留血液，排空管内积液，保持管腔湿润无菌。

温和腔内消化：管内注入0.2%胰酶，37℃恒温孵育8min，轻柔拍打血管外壁，促进内皮细胞脱落。

终止收集细胞：加入含血清培养基灌入管内终止消化，冲洗收集全部细胞悬液，离心富集细胞。

常规贴壁培养：重悬细胞后常规接种，37℃、5%CO₂培养，24h观察贴壁情况。

隔日全量换液：接种24h换液，后续每48h全量换液，清除代谢废物，维持细胞单层生长。

标准比例传代：细胞融合90%传代，温和消化后1:3比例分瓶，扩增效率稳定。

经典形态鉴定：细胞呈典型铺路石样形态，单层无堆叠，无污染、无老化即为合格。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.使用纤维连接蛋白(10ug/ml)包被培养器皿可显著改善内皮细胞贴壁速度和铺展形态。

3.内皮细胞体外具有增殖能力，传代比例建议1:3至1:4，细胞融合达80-90%时需及时传代避免接触抑制。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.换液时每2天更换一次新鲜培养基，换液时动作轻柔避免冲刷已贴壁的内皮细胞单层。