人脐带血间充质干细胞

人脐带血间充质干细胞

采用组织块贴壁法从健康供体的脐带血间充质干细胞来源组织（骨髓/脐带/脂肪等）中分离间充质成分，经密度梯度离心纯化单核细胞后，接种于未包被培养皿中，使用 α-MEM 培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过流式细胞术检测干细胞标志物 CD90、CD44、CD105、STRO-1 表达，结合三系分化能力验证（成骨诱导 ALP 阳性/阿利新蓝染色、成脂诱导 Oil Red O 染色、成软骨诱导 Alcian Blue 染色）确认干细胞多能性。

产品名称：人脐带血间充质干细胞

英文名称： Human Umbilical Cord Blood Mesenchymal Stem Cells

组织来源： 脐带血

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人脐带血间充质干细胞采用密度梯度离心法、差速贴壁法结合培养基筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人脐带血间充质干细胞经CD29或CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人脐带血间充质干细胞完全培养基(间充质干细胞专用基础培养基，含生长添加剂、FBS、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人脐带血间充质干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

脐带血离心预处理：新鲜脐带血低速离心去除红细胞碎片与血浆杂质，保留有核细胞层。

干细胞分离接种：利用贴壁筛选法分离干细胞，有核细胞悬液接种培养瓶，静置4h，弃悬浮杂细胞，保留贴壁干细胞。

专用无血清培养：更换脐带血MSC专用无血清完全培养基，恒温恒湿培养，避免血清导致细胞分化。

长周期换液：初期每5天换液一次，待细胞克隆形成后，改为每3天换液，缓慢扩增。

温和传代扩增：细胞融合85%传代，低浓度胰酶短时消化，1:2比例缓慢扩增，严控传代速度。

干细胞干性鉴定：定期检测细胞表面标志物，CD90、CD105阳性率≥95%，维持干细胞干性。

梯度冻存保活性：纯化干细胞用干细胞专用冻存液重悬，程序梯度降温冻存，最大程度保留分化潜能。

1.取材过程中需保持组织湿润和低温，血管组织离体后超过30分钟会导致内皮细胞活力明显下降。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.内皮细胞体外具有增殖能力，传代比例建议1:3至1:4，细胞融合达80-90%时需及时传代避免接触抑制。

4.在基础培养基中补充20%胎牛血清、10ng/ml EGF和2ug/ml肝素钠，可维持内皮细胞表型稳定。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。