人皮肤癌组织源细胞

人皮肤癌组织源细胞

运用酶消化-密度梯度离心联合法从健康供体手术切除的肿瘤组织中分离原代癌细胞，经胶原酶 I/II 和 Dispase 联合消化后通过 30%-50% 连续 Percoll 梯度离心富集肿瘤细胞，接种于 Matrigel 预包被的培养皿中使用肿瘤专用培养基（含 10% FBS、EGF 20 ng/mL、bFGF 5 ng/mL 及 Hydrocortisone）培养；通过免疫荧光检测上皮-间质转化（EMT）标志物 E-cadherin/Vimentin 表达转换、CK5/6 及 p63 等癌细胞标志物

产品名称：人皮肤癌组织源细胞

英文名称： Human Skin Cancer Tissue-Derived Cells

组织来源： 皮肤癌组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的癌组织源细胞采用胶原酶消化、经Percoll离心纯化制备而来。

质量检测  实验室分离的人皮肤癌组织源细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人皮肤癌组织源细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人皮肤癌组织源细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

癌组织精准取材：选取皮肤癌变活性病灶组织，剔除表层坏死结痂、正常皮肤表皮及皮下脂肪组织，无菌PBS冲洗去污。

胰酶-胶原酶联合消化：组织剪碎后，0.25%胰酶+胶原酶II联合消化3h，间断振荡，充分解离癌变单细胞，提升细胞得率。

高转速纯化离心：消化后过滤，400g高速离心10min，彻底去除组织残渣、死细胞碎片，富集高活性肿瘤细胞。

高营养扩增培养：使用含20%胎牛血清的高糖完全培养基培养，适配癌细胞快速增殖需求，24h持续恒温培养。

高频换液筛选：每24h全量换液一次，持续清除凋亡细胞与代谢废物，筛选稳定增殖的皮肤癌源细胞。

超密传代扩增：细胞融合70%即可传代，1:4高比例分瓶扩增，快速获得大量肿瘤细胞，满足实验用量需求。

恶性表型验证：培养稳定后，观察细胞堆叠生长、无接触抑制的恶性特征，通过克隆形成实验验证增殖恶性程度，合格后冻存。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。