产品名称 | 人皮层神经元细胞 | 组织来源 | 大脑皮质组织 |
英文名称 | Human Cortical Neurons | 种属 | 人 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3065 |
方法简介 实验室分离的人皮层神经元细胞采用胰蛋白酶消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来。
质量检测 实验室分离的人皮层神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 人皮层神经元细胞完全培养基(含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 神经元细胞样
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 0.125%胰蛋白酶
人皮层神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：健康成人供体，需快速取材以保证神经元活力
试剂：0.25%胰蛋白酶、I/II型胶原酶、DNase I、M199培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、Neurobasal培养基、B27添加剂、NGF、BDNF、NT-3、聚赖氨酸、脑基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标脑区/脊髓/神经组织，用预冷无钙镁PBS仔细冲洗
在显微镜下仔细分离目标区域，去除血管和膜组织，剪碎至1mm3
用0.25%胰蛋白酶在37度消化15-20分钟，加入DNase I辅助消化
用含FBS的DMEM终止消化，移液器轻柔吹打制成单细胞悬液
经40um滤网过滤后，300g离心5分钟收集神经元细胞
原代培养要点
将神经元细胞接种于聚赖氨酸包被的盖玻片或培养皿中，使用Neurobasal+B27培养基
接种密度建议1-2x10^5 cells/cm2，37度、5% CO2、95%湿度培养
神经元培养需添加NGF(10ng/mL)、BDNF(10ng/mL)等神经营养因子
7-14天后可观察到明显的神经元突起生长，21天后形成神经网络
常见问题优化
神经元存活率低：培养基中添加GlutaMAX和丙酮酸钠可提高神经元存活率
胶质细胞过度生长：使用Ara-C(10uM)处理可抑制胶质细胞增殖
神经元突起生长不良：添加NGF、BDNF等神经营养因子，使用脑基质胶包被基底
大鼠肿瘤坏死因子β1(TNF-β1)elisa试剂盒 | OCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞 |
大鼠肿瘤坏死因子受体超家族成员6B(TNFRSF6B；DCR3 )elisa试剂盒 | 大鼠牙髓干细胞 |
大鼠肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)elisa试剂盒 | 大鼠背根神经节细胞 |
大鼠粘胶蛋白;肌腱蛋白C(TN-C)elisa试剂盒 | TTA1（人甲状腺癌细胞）(STR鉴定正确) |
大鼠H2A组蛋白家族成员X(H2AX)elisa试剂盒 | 小鼠胚胎成纤维细胞Balb/3T3（种属鉴定） |
大鼠humanin肽(MT-RNR2)elisa试剂盒 | 大鼠肾间质成纤维细胞 |
猪天门冬氨酸氨基转移酶（AST）elisa试剂盒 | 人原代角膜上皮细胞 |
OVCAR-3人卵巢腺癌细胞专用培养基 | GSPT2基因过表达细胞株 |
Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞专用培养基 | KAT14基因过表达细胞株 |
大鼠原代软骨细胞专用培养基 | DDX59基因过表达细胞株 |
DMEM无糖培养基 | PTPRE基因过表达细胞株 |
人甲状旁腺细胞永生化细胞专用培养基 | ARID5A基因过表达细胞株 |
人皮层神经元细胞大鼠原代鼓膜上皮干细胞专用培养基 | DQX1基因过表达细胞株 |
Duckembryo细胞专用培养基 | CCDC175基因过表达细胞株 |
培养板多聚赖氨酸包被：实验前24h，用多聚赖氨酸溶液包被培养板，室温过夜，次日无菌水洗3次，风干备用，为神经元提供粘附支架。
冰上无菌解离：胚胎皮层组织全程冰上操作，无菌剥离血管与脑膜，剪碎后用胰酶37℃短时消化15min，终止后轻柔吹打制备单细胞悬液。
精准高密度接种：神经元细胞无增殖能力，按3×10⁵个/mL高密度接种，保障细胞相互连接、形成突触结构。
半量避光换液：神经元对光线、震动敏感，每3天避光半量换液，操作轻柔，严禁晃动培养板，防止神经元脱落。
禁止常规传代：成熟皮层神经元为终末分化细胞，不可传代培养，仅可原代培养，老化细胞直接废弃处理。
抑菌养护处理：培养全程添加低浓度双抗，避免杂菌污染，同时严控培养箱温度、CO₂浓度，参数波动不超过±0.5。
形态活性鉴定：培养7天观察，细胞胞体饱满、突触清晰延伸、网络连接完整，无空泡凋亡，即为合格可用细胞。
