人膀胱移行上皮细胞

人膀胱移行上皮细胞

基于组织块贴壁法从健康供体的膀胱移行上皮细胞来源组织中获取初始细胞，经 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 传代后，采用特异性上皮细胞培养体系（K-SFM 基础培养基 supplemented with bovine pituitary extract）维持培养；通过免疫荧光双标技术检测 E-cadherin/CK5 共表达，Western blot 分析上皮标志蛋白表达谱，并结合Transwell模型评估细胞极化和紧密连接蛋白（ZO-1、Claudin）的定位表达。

产品名称：人膀胱移行上皮细胞

英文名称： Human Bladder Transitional Epithelial Cells

组织来源： 膀胱组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人膀胱移行上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人膀胱移行上皮细胞经Cytokeratin-AE1/AE3免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人膀胱移行上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人膀胱移行上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

黏膜组织取材：无菌获取膀胱移行区黏膜组织，全程低温保湿，避免黏膜干燥受损，快速剔除下层结缔组织。

EDTA预处理分离：组织块先用0.02%EDTA溶液4℃浸泡30min，松动上皮与基底组织连接，便于后续细胞解离。

短时胰酶解离：预处理后用0.25%胰酶室温轻柔消化15min，间断吹打，分离表层移行上皮细胞，避免深层杂细胞混入。

低密静置培养：过滤离心后的细胞，用上皮专用培养基重悬，低密度1×10⁵个/mL接种，静置培养减少细胞堆叠。

半量换液养护：培养前5天采用隔日半量换液，维持细胞生长微环境稳定，避免全量换液导致细胞应激凋亡。

低密度传代：细胞融合80%传代，低浓度胰酶温和消化，传代比例1:5，严格控制细胞密度，防止过度增殖导致细胞分化异常。

分化状态质控：正常移行上皮细胞呈多边形、单层规整排列，无多层异常增殖，细胞分化均一性达标后留存使用。

1.取材后需立即将组织置于含10%胎牛血清的Hanks液中运输，4度条件下尽快完成目标脑区的分离与纯化。

2.培养表面需用0.01mg/ml纤连蛋白和0.1mg/ml多聚赖氨酸双重包被，神经元贴壁率和轴突延伸长度均有显著提升。

3.神经元为终末分化细胞，体外不具备增殖能力，建议分离后3-5天内完成电生理记录或免疫荧光等功能实验。

4.在基础培养基中添加NGF(100ng/ml)、BDNF(20ng/ml)及GDNF(10ng/ml)三种神经营养因子，可显著提高神经元存活率。

5.换液时仅半量更换新鲜培养基，完全换液会破坏神经元依赖的神经营养因子微环境，造成大量神经元轴突断裂、漂浮死亡。