人膀胱平滑肌细胞

人膀胱平滑肌细胞

采用组织块贴壁法从健康供体的膀胱平滑肌细胞来源组织中分离原代细胞，经胰蛋白酶消化传代后，接种于明胶包被的培养皿中，使用 DMEM/F12 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL PDGF-BB）培养；通过免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）及 h-caldesmon 等平滑肌特异性标志物，结合细胞形态学观察（梭形、蜂房样排列）确认平滑肌细胞身份。

产品名称：人膀胱平滑肌细胞

英文名称： Human Bladder Smooth Muscle Cells

组织来源： 膀胱组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人膀胱平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的人膀胱平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人膀胱平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人膀胱平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

肌层组织剥离：无菌分离膀胱平滑肌层，彻底剔除内膜上皮组织与外膜结缔组织，仅保留纯净平滑肌组织，PBS反复冲洗去除血污。

复合酶解解离：组织剪碎后加入II型胶原酶+分散酶复合消化液，37℃消化2h，精准解离平滑肌细胞，最大程度保留细胞收缩活性。

低速离心富集：消化后滤网过滤，收集悬液，250g离心6min，富集平滑肌细胞沉淀，弃除细碎组织与细胞碎片。

专属培养基培养：用平滑肌细胞专用低血清完全培养基重悬细胞，接种密度5×10⁵个/mL，37℃、5%CO₂静置培养，避免晃动影响贴壁。

延时首次换液：接种后48h首次换液，保障细胞充分贴壁伸展，后续每3天换液一次，维持细胞节律性生长状态。

温和消化传代：细胞融合85%传代，缩短胰酶消化时间至2min，轻柔吹打细胞，避免损伤平滑肌细胞肌丝结构，传代比例1:2。

功能活性检测：培养稳定后，观察细胞梭形、纺锤状典型形态，检测细胞收缩功能，无功能缺陷、无污染即可用于实验或冻存。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.培养器皿无需特殊包被，成纤维细胞具有较强的自主贴壁和铺展能力，常规培养皿即可。

3.成纤维细胞体外增殖能力强，传代比例1:3至1:5，细胞融合达80-90%时需及时传代防止过度融合。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.使用人源组织标本需获得伦理委员会批准及患者知情同意，操作需符合生物安全规范。 换液时每2-3天更换一次新鲜培养基，成纤维细胞代谢旺盛需及时补充营养和清除代谢产物。