人膀胱癌组织源细胞

人膀胱癌组织源细胞

采用组织块贴壁法从健康供体肿瘤组织标本中分离癌组织源细胞，经机械剪碎后与胶原酶 IV、透明质酸酶和 DNAse I 联合消化 2-4h，通过 Percoll 密度梯度离心去除坏死组织和红细胞，将肿瘤细胞接种于含 20% FBS 的 DMEM/F12 完全培养基中培养；通过形态学观察（细胞多形性、核质比增高、锚定非依赖性生长）和免疫荧光检测肿瘤标志物（如 CK7、CK19、CEA 等组织特异性标志）验证恶性表型，并经 Ki-67 增殖指数检测和动物成瘤实验确认肿瘤细胞活性与致瘤性。

产品名称：人膀胱癌组织源细胞

英文名称： Human Bladder Cancer Tissue-Derived Cells

组织来源： 膀胱癌组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的癌组织源细胞采用胶原酶消化、经Percoll离心纯化制备而来。

质量检测  实验室分离的人膀胱癌组织源细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人膀胱癌组织源细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人膀胱癌组织源细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

肿瘤组织无菌处理：新鲜膀胱癌组织离体30min内处理，无菌PBS+双抗浸泡冲洗5次，彻底去除血液、坏死组织及微生物污染，剔除正常膀胱黏膜及脂肪组织。

酶解分离细胞：将肿瘤组织剪碎至糊状，加入0.2%胶原酶IV，37℃恒温振荡消化2h，期间每隔15min轻柔吹打一次，充分解离肿瘤原代细胞。

过滤纯化细胞：消化结束后，依次通过100目、200目无菌滤网过滤，去除未消化组织残渣，收集单细胞悬液，300g离心8min，弃上清收集细胞沉淀。

高糖培养基培养：用含15%胎牛血清的高糖DMEM完全培养基重悬细胞，按2×10⁵个/mL密度接种，37℃、5%CO₂培养，适配肿瘤细胞高增殖代谢需求。

动态换液筛选：培养24h后首次换液，去除死细胞及杂细胞，后续每48h换液，持续筛选稳定增殖的肿瘤源细胞，淘汰衰老凋亡细胞。

快速传代扩增：细胞融合度达75%即可传代（肿瘤细胞增殖快，避免过度密集老化），常规胰酶消化1-2min，终止离心后1:3比例分瓶扩增。

肿瘤特性鉴定：扩增后观察细胞形态，肿瘤细胞呈不规则多边形、堆叠生长，无接触抑制，同时通过细胞增殖实验验证其恶性增殖特性，合格后冻存备用。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.培养器皿无需特殊包被，普通培养板即可支持平滑肌细胞贴壁，但用纤连蛋白包被可增强细胞贴附。

3.平滑肌细胞增殖速度中等，约3-4天换液一次，融合后呈峰谷状排列(蜂窝样)为典型特征。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.培养期间每48小时换液，若发现细胞由梭形变为多角形可能提示表型转换，需调整实验时间窗。