人脑膜细胞

人脑膜细胞

采用组织块贴壁法从健康供体的脑膜细胞来源组织中分离原代细胞，经胶原酶 II 和胰蛋白酶联合消化后，通过密度梯度离心纯化目标细胞，接种于明胶包被的培养皿中使用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、1% 双抗）培养；通过免疫荧光染色检测细胞特异性标志物表达，结合形态学观察和 RT-qPCR 分子鉴定确认细胞身份。

产品名称：人脑膜细胞

英文名称： Human Meningeal Cells

组织来源： 脑膜组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人脑膜细胞采用胰蛋白酶消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的人脑膜细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人脑膜细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人脑膜细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：取出液氮冻存的人脑膜细胞冻存管，75%酒精擦拭管壁消毒，快速放入37℃恒温水浴锅匀速晃动，1-2分钟快速融化，仅留微量冰晶即可取出，避免长时间水浴损伤细胞膜结构。

离心去冻存液：将融化后的细胞悬液缓慢移入含4mL脑膜细胞专用完全培养基的无菌离心管中，轻柔吹打混匀，室温200g低速离心5min，彻底去除含DMSO的冻存上清，减少细胞毒性。

细胞接种铺板：弃上清后，用2mL脑膜细胞专用完全培养基轻柔重悬细胞沉淀，避免剧烈吹打，按1×10⁵个/mL的密度接种于无包被的无菌培养瓶，置于37℃、5%CO₂、饱和湿度培养箱静置培养。

日常换液养护：接种后24h首次换液，去除未贴壁死细胞与杂质，后续每48h更换一次新鲜完全培养基，换液时沿培养瓶侧壁缓慢加液，防止冲刷贴壁薄弱的脑膜细胞。

消化传代操作：细胞融合度达85%-90%时进行传代，弃旧培养基，无菌PBS清洗2次，加入0.25%胰酶-EDTA覆盖细胞层面，37℃消化2min，显微镜下观察细胞回缩变圆后，立即加入完全培养基终止消化。

细胞冻存保存：收集消化后的单细胞悬液，200g离心5min，弃上清，用预冷的脑膜细胞专用冻存液重悬，调整细胞密度为1×10⁶个/管，梯度降温后转入液氮长期保存。

细胞状态质控：日常观察细胞形态，正常人脑膜细胞呈多边形、铺路石样整齐排列，无空泡、无皱缩，传代后存活率需≥90%，污染率为0。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。