人脉络膜微血管内皮细胞

人脉络膜微血管内皮细胞

运用组织块贴壁-酶消化联合法分离健康供体脉络膜微血管内皮细胞，经密度梯度离心纯化内皮祖细胞后接种于明胶包被培养表面，采用含有血管内皮生长因子（VEGF 20 ng/mL）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF 5 ng/mL）和肝素（5 μg/mL）的 MCDB-131 培养基培养；通过免疫荧光检测 CD31、CD146、eNOS 表达，流式细胞术分析 CD31+/CD146+ 双阳性细胞比例，并经管状结构形成实验验证内皮细胞功能特性。

产品名称：人脉络膜微血管内皮细胞

英文名称： Human Choroidal Microvascular Endothelial Cells

组织来源： 脉络膜组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人脉络膜微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人脉络膜微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 人脉络膜微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： Accutase消化液或0.25%胰蛋白酶

人脉络膜微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：脉络膜微血管内皮细胞眼部特异性强，避光温和复苏。37℃精准解冻，消毒后移入眼部微血管专用培养基，950rpm离心5min，重悬后避光静置36h。

细胞换液：复苏36h半量换液，后续每72h全量避光换液，维持眼部微血管屏障功能。

细胞传代：细胞融合度90%传代，低浓度消化2min，按1:5比例传代，稳定细胞功能。

细胞消化：低损伤消化，保护眼部微血管内皮特异性结构，轻柔分散细胞。

细胞冻存：冻存液88%专用培养基+10%FBS+2%DMSO，低毒保护，细胞密度7×10⁵个/mL。

细胞接种：接种密度5×10³个/cm²，避光静置7h贴壁，单层规整生长。

细胞质控：细胞形态均一、屏障功能完好、无变异污染，微血管生成能力正常，适用于眼部脉络膜微循环病变研究。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.培养过程中需注意CO2浓度维持在5%正负0.5%，pH值保持在7.2-7.4范围内。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。