产品名称 | 人脉络膜黑色素细胞 | 组织来源 | 脉络膜组织 |
英文名称 | Human Choroidal Melanocytes | 种属 | 人 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3372 |
方法简介 实验室分离的人脉络膜黑色素细胞先用中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-胶原酶混合消化结合专用培养基筛选法制备而来。
质量检测 实验室分离的人脉络膜黑色素细胞经Dopa染色检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 人脉络膜黑色素细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 长梭形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人脉络膜黑色素细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：健康成人供体，取目标组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、I/II型胶原酶、DNase I、M199培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、相应专用培养基组分
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷PBS冲洗去除血液和杂质
剪碎组织后采用胶原酶消化法(37度、1-2小时)分散细胞
过滤后300g离心8-10分钟收集细胞
根据细胞类型采用适当方法进一步纯化(密度梯度离心/免疫磁珠分选/差速贴壁)
原代培养要点
将纯化后的细胞接种于适当包被的培养皿中
使用含10%FBS的DMEM/F12完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，根据细胞生长特性调整培养条件
常见问题优化
细胞得率低：根据组织特性优化消化时间和酶浓度
细胞纯度不高：采用多种纯化方法联合使用提高纯度
细胞表型维持：控制传代次数，必要时采用特殊培养基或包被基质
大鼠丙糖磷酸异构酶1(TPI1)elisa试剂盒 | NCI-H508人结肠直肠腺癌细胞 |
大鼠色氨酸羟化酶1(TPH1)elisa试剂盒 | 大鼠三叉神经元细胞 |
大鼠组织型纤溶酶原激活物抑制剂1(t-PA1)elisa试剂盒 | 大鼠脊髓微血管内皮细胞 |
大鼠胸腺五肽(TP-5)elisa试剂盒 | NCI-H1563 (人胚肺细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)elisa试剂盒 | 恒河猴肾细胞MA-104（种属鉴定） |
大鼠F框唯一蛋白32(MAFbx；FBXO32)elisa试剂盒 | 大鼠颌下腺上皮细胞 |
猪维生素A（VA）elisa试剂盒 | 兔原代小梁网细胞 |
NPC/HK-1人鼻咽癌细胞专用培养基 | SEL1L2基因过表达细胞株 |
panc02小鼠胰腺癌细胞专用培养基 | CDH24基因过表达细胞株 |
大鼠原代附睾上皮细胞专用培养基 | ARMC12基因过表达细胞株 |
CW2细胞专用培养基 | AFG1L基因过表达细胞株 |
人原代CIK细胞专用培养基 | SOX6基因过表达细胞株 |
人脉络膜黑色素细胞大鼠原代宫颈上皮细胞专用培养基 | DNAI1基因过表达细胞株 |
DC2.4细胞专用培养基 | CDK15基因过表达细胞株 |
细胞复苏：脉络膜黑色素细胞含色素颗粒、特异性高，避光低温复苏。37℃慢速解冻，消毒后移入黑色素细胞专用培养基，1000rpm离心5min，避光重悬接种，静置48h。
细胞换液：复苏48h首次换液，后续每72h避光换液，维持色素合成功能，避免光照导致细胞功能衰退。
细胞传代：细胞融合度92%传代，温和消化3min，轻柔脱壁，按1:2比例传代，严控传代次数。
细胞消化：慢速充分消化，避免色素细胞破损、色素外泄，轻柔吹打保持细胞完整。
细胞冻存：避光梯度冻存，冻存液90%FBS+10%DMSO，细胞密度7×10⁵个/mL，保留色素合成功能。
细胞接种：接种密度8×10³个/cm²，避光静置8h贴壁，均匀生长。
细胞质控：细胞形态规整、色素颗粒均匀、合成功能稳定，无褪色、无老化，无菌无污染，适用于脉络膜色素病变、眼部黑色素机制研究。
