人卵巢癌组织源细胞

方法简介  实验室分离的癌组织源细胞采用胶原酶消化、经Percoll离心纯化制备而来。

质量检测  实验室分离的人卵巢癌组织源细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人卵巢癌组织源细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人卵巢癌组织源细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前置准备

样本来源：健康成人供体，手术切除的新鲜肿瘤组织(距手术取材<2小时)

试剂：0.25%胰蛋白酶、I/II型胶原酶、DNase I、M199培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS、抗生素

分离纯化步骤

取新鲜肿瘤组织，仔细去除坏死组织和周围正常组织

将肿瘤组织剪碎至1mm3大小，加入II型胶原酶和Dispase混合消化液

37度振荡消化1-2小时(根据组织硬度调整)，期间取样检测消化效果

消化液经70um和40um滤网过滤，300g离心10分钟收集肿瘤细胞

将细胞接种于培养皿中，使用含20%FBS的完全培养基培养

原代培养要点

肿瘤细胞培养使用DMEM/F12+20%FBS+1%双抗完全培养基，37度、5% CO2

肿瘤细胞贴壁时间差异较大(24小时-7天)，需耐心观察

每2-3天换液一次，肿瘤细胞增殖较快，融合达80%时传代

原代肿瘤细胞传代3-5代后可能出现表型变化，建议尽早冻存

常见问题优化

肿瘤细胞生长缓慢：添加10ng/mL EGF和5ug/mL胰岛素可促进增殖

正常细胞污染：采用差速贴壁法或药物筛选(如5-FU)去除正常细胞

肿瘤细胞异质性：建议从同一患者多部位取材混合培养以提高代表性

细胞复苏：卵巢癌细胞侵袭性强、增殖快，快速低损复苏。37℃水浴1min内解冻，消毒后移入高糖完全培养基，800rpm离心4min，快速重悬接种，缩短常温暴露时间。

细胞换液：复苏12h首次换液，清除大量凋亡细胞，后续每24h换液一次，高营养供给适配高速增殖需求。

细胞传代：细胞融合度65%-70%即可传代，避免密集堆叠侵袭成团。胰酶消化40s，快速脱壁终止，按1:5高比例传代。

细胞消化：超短时间消化，防止癌细胞黏附聚集，快速吹打打散团块，保证单细胞悬液。

细胞冻存：对数生长期活跃细胞冻存，冻存液80%培养基+15%FBS+5%DMSO，细胞密度2×10⁶个/mL，快速分装冻存。

细胞接种：侵袭实验低密度接种5×10³个/cm²，增殖实验4×10³个/cm²，快速贴壁生长。

细胞质控：细胞形态异型性明显、增殖侵袭能力强，无大量坏死漂浮细胞，无菌无污染，增殖稳定，适用于卵巢癌侵袭、转移、靶向药物研究。