人晶状体上皮细胞

人晶状体上皮细胞

利用胶原酶 IV 和透明质酸酶联合消化法从健康供体靶组织中分离晶状体上皮细胞，经 Percoll 梯度离心去除杂细胞后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、EGF 5 ng/mL 及胰岛素）进行体外扩增；通过流式细胞术检测上皮特异性抗原（ESA）、CD326 表达率，免疫细胞化学染色显示细胞骨架波形蛋白（Vimentin）阴性、细胞角蛋白阳性，并经功能实验验证其屏障功能完整性。

产品名称：人晶状体上皮细胞

英文名称： Human Lens Epithelial Cells

组织来源： 晶状体组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人晶状体上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人晶状体上皮细胞经BFSP2（晶状体蛋白）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人晶状体上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人晶状体上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：晶状体上皮细胞为眼部特异性脆弱细胞，复苏低损操作。37℃精准解冻，消毒后移入晶状体专用培养基，950rpm离心5min，温和重悬，接种后静置48h，减少外界刺激。

细胞换液：复苏48h首次换液，后续每72h换液一次。低温PBS轻柔润洗，去除微量杂质，更换新鲜培养基，抑制细胞上皮间质转化，维持原有上皮形态。

细胞传代：细胞融合度88%传代，低浓度胰酶消化5min，脱壁后终止消化，离心重悬，按1:2比例传代，严控传代次数，避免细胞纤维化变异。

细胞消化：温和消化，精准控制时长，避免损伤细胞特异性功能，轻柔吹打，保证细胞单体分散，无团块、无形态变异。

细胞冻存：选取形态规整、无异型转化的细胞，冻存液90%FBS+10%DMSO，细胞密度7×10⁵个/mL，慢速梯度降温冻存，保留细胞原有特性。

细胞接种：接种密度5×10³个/cm²，均匀铺板，静置7h贴壁，保证单层规整生长，无堆叠变异。

细胞质控：合格细胞呈多边形上皮形态、排列致密、无梭形纤维化转变，增殖稳定、凋亡率低，无菌无污染，适用于白内障、晶状体损伤机制研究。

1.取材过程中需保持组织湿润和低温，血管组织离体后超过30分钟会导致内皮细胞活力明显下降。

2.培养器皿需用0.2%明胶预包被30分钟，PBS洗涤后加入内皮细胞专用培养基方可接种。

3.内皮细胞体外具有增殖能力，传代比例建议1:3至1:4，细胞融合达80-90%时需及时传代避免接触抑制。

4.培养基中需添加EGM-2内皮细胞生长添加剂套装，包含VEGF、FGF-b、EGF和hydrocortisone等关键生长因子。

5.换液前预先检查培养基pH和颜色，若培养基过早变黄提示需缩短换液间隔至24小时。