人结肠黏膜上皮细胞

人结肠黏膜上皮细胞

基于组织块贴壁法从健康供体的结肠黏膜上皮细胞来源组织中获取初始细胞，经 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 传代后，采用特异性上皮细胞培养体系（K-SFM 基础培养基 supplemented with bovine pituitary extract）维持培养；通过免疫荧光双标技术检测 E-cadherin/CK5 共表达，Western blot 分析上皮标志蛋白表达谱，并结合Transwell模型评估细胞极化和紧密连接蛋白（ZO-1、Claudin）的定位表达。

产品名称：人结肠黏膜上皮细胞

英文名称： Human Colonic Mucosal Epithelial Cells

组织来源： 结肠组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人结肠黏膜上皮细胞采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人结肠黏膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人结肠黏膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人结肠黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：结肠黏膜上皮细胞为脆弱原代细胞，复苏温和低损。37℃慢速解冻，消毒后移入黏膜上皮专用低血清培养基，1000rpm离心5min，轻柔重悬，接种后静置36h，等待细胞稳定贴壁伸展。

细胞换液：复苏36h首次换液，后续每72h换液一次。PBS温和润洗去除肠道代谢杂质残留，更换新鲜培养基，维持黏膜上皮细胞极性形态，防止细胞去分化。

细胞传代：细胞融合度90%传代，黏膜上皮细胞连接致密。低浓度胰酶消化5min，充分解离细胞连接，终止消化后离心重悬，按1:2低比例传代，保证细胞极性稳定、形态规整。

细胞消化：针对性解离上皮细胞紧密连接，消化时间精准5min，轻敲瓶壁辅助脱落，轻柔吹打，保留细胞完整极性结构，无破损、无团块。

细胞冻存：选取形态规整、极性完好的黏膜上皮细胞，冻存液90%FBS+10%DMSO，高密度保护原代细胞活性。细胞密度7×10⁵个/mL，梯度降温液氮保存。

细胞接种：接种密度8×10³个/cm²，适配黏膜上皮细胞密集生长特性，接种后静置8h贴壁，保证细胞单层极性生长。

细胞质控：合格细胞呈规则多边形、排列整齐、极性稳定，无梭形变异、无老化空泡，无菌无污染。细胞屏障功能稳定，适用于肠道黏膜损伤、炎症、肠道屏障机制研究。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。