鸡原代细胞

 产品简介

鸡原代细胞由鸡胚或雏鸡新鲜组织经酶消化（胰酶、胶原酶）分离获得，保留禽类细胞天然基因表达、生理功能；多用于病毒增殖、兽药筛选、免疫学、发育生物学、禽类毒理体外实验。

 ⚠️重要提示：

1. 胚龄直接影响细胞活性：8‑12 日鸡胚分离的原代细胞增殖能力最好；胚龄过大细胞增殖弱、易老化PMC。

2. 上皮类原代细胞极易混杂成纤维细胞，随培养时间延长成纤维会过度生长，建议早期开展实验PMC。

3. 不适合长期传代、构建稳定基因编辑株。

培养基与配套试剂

1. 鸡原代专用完全培养基：基础培养基（DMEM / MEM）+ 禽类原代生长添加剂 + 胎牛血清 + 青霉素‑链霉素双抗PMC

 ❗不建议直接使用普通哺乳动物完全培养基，禽类原代对营养、碳酸氢盐浓度敏感，易出现生长差、凋亡。

2. 消化液：0.25% 胰蛋白酶‑EDTA；致密组织可搭配 Ⅰ/Ⅱ 型胶原酶。

3. 终止液：含血清完全培养基。

4. 清洗液：无菌无钙镁 PBS，pH7.2‑7.4。

细胞接收与复苏

 1. 收货检查

- 干冰运输冻存管：收到尽快转入液氮气相长期保存；‑80℃暂存不超过 7 天，‑80 长期存放活率快速下降。

- T25 活细胞瓶：静置 2‑4 h 稳定后镜检，观察贴壁、细菌真菌污染。

 2. 复苏操作

1. 37℃水浴预热完全培养基；

2. 冻存管投入 37℃水浴快速融化，1‑2 min，仅剩少量冰屑取出；

3. 75% 酒精消毒管壁，无菌操作将细胞悬液移入离心管，加入 5‑6 mL 完全培养基轻柔混匀；

4. 1000 rpm，5 min 离心，弃上清，降低 DMSO 毒性；

5. 新鲜完全培养基轻柔重悬细胞，接种培养瓶；

6. 置于37‑38℃、5%CO₂培养箱；24 h 内不要晃动培养瓶，保证贴壁ATCC。

传代培养操作

 汇合度 70‑80% 传代，严禁 100% 长满；禽类原代接触抑制较强，高密度会加速老化、表型改变。

1. 吸弃旧培养基，PBS 清洗细胞 2 次；

2. 加入消化液覆盖细胞层，37℃孵育；镜下看到细胞回缩变圆，立刻终止；

3. 加入等体积含血清培养基终止消化；轻柔吹打瓶壁收集细胞悬液；

4. 1000 rpm 离心 5 min，弃上清；

5. 新鲜完全培养基重悬；推荐传代比例 1:2，尽量不做 1:3 及以上稀释；

6. 补加培养基放回培养箱。

 特殊提示：鸡上皮原代细胞增殖弱，尽量少传代，优先 P0 代做实验。

细胞冻存

1. 选取对数生长期、汇合度 70‑80% 健康原代细胞；

2. 酶消化、离心收集细胞沉淀；

3. 冻存液：90% FBS+10% DMSO，或商品化禽类无血清冻存液；

4. 分装冻存管；程序降温：4℃ 30 min →‑20℃ 1‑2 h →‑80℃过夜 →转入液氮气相长期保存；

 禁止直接投入液氮，骤冷会大量死亡。

质量控制

1. 复苏活率 ≥80%；

2. 微生物：细菌、真菌、支原体阴性；

3. 物种来源验证：鸡源，无交叉物种污染；

4. 标志物鉴定：

   - 成纤维：Vimentin、CD29 阳性

   - 上皮：CK‑18、E‑cadherin 阳性PMC

   - 软骨细胞：Ⅱ 型胶原阳性

注意事项

1. 支原体对禽类原代危害大，全程严格无菌，定期支原体检测；

2. 血清批次影响显著，尽量固定血清批次，不要频繁更换；

3. 老化特征：细胞胞体膨大扁平、胞内颗粒、空泡增多、增殖停滞，出现老化直接弃用；

4. 本产品仅用于体外科学研究，禁止体内临床应用；

5. 实验废弃物按 BSL‑2 生物安全规范灭活；

6. 禽类原代细胞较脆弱，吹打动作轻柔，避免机械损伤；

7. 培养温度不可长期 37℃以下，会明显抑制禽类细胞增殖。