人结肠癌组织源细胞

人结肠癌组织源细胞

运用酶消化-密度梯度离心联合法从健康供体手术切除的肿瘤组织中分离原代癌细胞，经胶原酶 I/II 和 Dispase 联合消化后通过 30%-50% 连续 Percoll 梯度离心富集肿瘤细胞，接种于 Matrigel 预包被的培养皿中使用肿瘤专用培养基（含 10% FBS、EGF 20 ng/mL、bFGF 5 ng/mL 及 Hydrocortisone）培养；通过免疫荧光检测上皮-间质转化（EMT）标志物 E-cadherin/Vimentin 表达转换、CK5/6 及 p63 等癌细胞标志物

产品名称：人结肠癌组织源细胞

英文名称： Human Colon Cancer Tissue-Derived Cells

组织来源： 结肠癌组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的癌组织源细胞采用胶原酶消化、经Percoll离心纯化制备而来。

质量检测  实验室分离的人结肠癌组织源细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人结肠癌组织源细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人结肠癌组织源细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：结肠癌细胞增殖迅猛、耐受性强，采用快速复苏流程。37℃水浴1min内完全解冻，消毒管壁后，细胞悬液移入高糖完全培养基，800rpm低速离心4min，减少细胞机械损伤，重悬后快速接种，缩短常温暴露时间。

细胞换液：复苏12h首次换液，清除大量复苏凋亡细胞，后续每24h换液一次，维持高营养供给。无需PBS润洗，直接换液，适配癌细胞快速代谢需求，避免营养匮乏导致细胞坏死。

细胞传代：细胞融合度70%即可传代，癌细胞无接触抑制，极易堆叠成团。弃液润洗后，胰酶消化40-60s，快速脱壁终止消化，离心后按1:4~1:8超高比例传代，避免细胞密集堆叠坏死。

细胞消化：消化速度快、时间短，严格控制1min内完成，防止过度消化导致细胞活性下降。吹打快速均匀，彻底打散细胞团块，保证单细胞悬液，避免堆叠生长影响实验结果。

细胞冻存：选取对数生长期、无堆叠坏死的活跃癌细胞，冻存液配比80%完全培养基+15%FBS+5%DMSO。细胞密度5×10⁶个/mL，快速分装降温，液氮保存，适配癌细胞高增殖特性。

细胞接种：药物筛选实验低密度接种2×10³个/cm²，克隆形成实验超低密度接种1×10³个/cm²，增殖实验常规5×10³个/cm²。接种后快速摇匀，2h快速贴壁生长。

细胞质控：结肠癌细胞形态饱满、增殖极速、可堆叠生长，无大量悬浮死细胞，无污染、无老化。细胞增殖倍数稳定、克隆形成能力正常，支原体检测阴性，适用于肠癌增殖、侵袭、耐药、靶向药物研究。

1.手术获取组织后需立即在显微镜下剥离平滑肌层，避免成纤维细胞等杂细胞过度污染。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.该细胞体外传代能力较强，建议3-5代内使用，过高代次可能导致收缩表型标志物表达下降。

4.在DMEM培养基中补充10-20%FBS及1%青霉素-链霉素即可满足生长需求，必要时添加10ng/ml EGF。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。