人甲状腺滤泡上皮细胞

人甲状腺滤泡上皮细胞

采用Ⅱ型胶原酶联合 Dispase 对健康供体的甲状腺滤泡上皮细胞进行原代消化分离，经密度梯度离心纯化后接种于明胶预包被的培养皿中，使用 Keratinocyte-SFM 培养基（含 EGF 和 B27 添加剂）在 37°C、5% CO₂ 条件下培养；通过免疫荧光染色检测角蛋白（Keratin）5/8、细胞角蛋白 14（KRT14）及 E-cadherin 等上皮细胞特异性标志物表达，结合倒置显微镜观察细胞贴壁后呈铺路石样多边形 morphology 特征，并经 RT-qPCR 验证上皮标志基因表达水平

产品名称：人甲状腺滤泡上皮细胞

英文名称： Human Thyroid Follicular Epithelial Cells

组织来源： 甲状腺组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人甲状腺滤泡上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人甲状腺滤泡上皮细胞经TG（甲状腺球蛋白）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人甲状腺滤泡上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人甲状腺滤泡上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：上皮细胞耐受性弱，采用慢速温和复苏法。37℃水浴缓慢解冻，保留微量冰晶后取出，消毒管壁。将细胞悬液缓慢滴入4mL预热上皮细胞专用低血清培养基，轻柔混匀，1000rpm离心5min，弃上清，温和重悬细胞，避免机械损伤，接种后静置培养24h不挪动培养瓶。

细胞换液：复苏后48h首次换液，让上皮细胞充分贴壁适应环境。后续每72h换液一次，弃旧液后用无菌PBS缓慢润洗瓶壁，轻柔去除漂浮杂质，加入新鲜低血清完全培养基，维持细胞上皮形态，防止细胞去分化、纤维化转变。

细胞传代：细胞融合度达90%时传代，上皮细胞接触抑制明显。弃培养基，PBS润洗2次，加入专用上皮细胞消化液（胰酶+EDTA低浓度配比），37℃消化2-3min，待细胞完全变圆脱壁后终止消化。离心重悬，按1:2比例低比例传代，避免传代过密或过稀导致细胞生长停滞。

细胞消化：甲状腺滤泡上皮细胞连接紧密，需充分消化细胞间连接。消化前彻底去除残留血清，保证消化效率，恒温消化2-3min，期间可轻敲瓶壁辅助细胞脱落。消化后轻柔吹打，尽量保持细胞单体状态，减少细胞团块，避免影响后续增殖分化。

细胞冻存：选取形态规整、鹅卵石样的健康上皮细胞，采用高血清冻存体系（92%FBS+8%DMSO），无额外培养基添加，最大程度保护上皮细胞活性。细胞密度调整至8×10⁵个/mL，程序降温盒梯度降温，-80℃过夜后转入液氮，避免反复冻融。

细胞接种：上皮细胞依赖细胞间接触生长，接种密度不宜过低，常规按8×10³个/cm²接种。接种后缓慢十字摇匀，静置6h待完全贴壁，贴壁期间禁止移动培养板/瓶，防止细胞移位、脱落，保证细胞均匀铺展、形态规整。

细胞质控：合格细胞呈典型鹅卵石样上皮形态，排列紧密、边界清晰、折光性一致，无梭形纤维化变异。细胞生长缓慢、形态稳定，无自发凋亡，无菌无支原体污染，无去分化现象，可用于甲状腺生理功能、炎症机制研究。

1.取材时需尽量去除脂肪组织和坏死组织，将目标组织剪成1-2mm3小块后用酶消化法或组织块法进行原代培养。

2.培养器皿无需特殊包被，成纤维细胞具有较强的自主贴壁和铺展能力，常规培养皿即可。

3.成纤维细胞体外增殖能力强，传代比例1:3至1:5，细胞融合达80-90%时需及时传代防止过度融合。

4.使用DMEM高糖培养基加10%FBS和1%双抗，成纤维细胞在此条件下增殖旺盛形态均匀。

5.换液时用PBS洗涤可减少培养基中积累的代谢废物，有利于维持细胞健康状态。