人骨髓树突状细胞(DC细胞)

人骨髓树突状细胞(DC细胞)

采用密度梯度离心法从健康供体的骨髓树突状细胞(DC细胞)来源血液或组织中分离免疫细胞，经 NH₄Cl 裂解红细胞后，接种于未包被培养皿中，使用 RPMI-1640 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL M-CSF/G-CSF）培养；通过流式细胞术检测 CD11b、F4/80（大鼠）、CD14、CD86 等巨噬细胞/免疫细胞标志物表达，结合 MTT 增殖实验和吞噬功能实验（荧光微球吞噬 assay）验证免疫细胞活性与功能。

产品名称：人骨髓树突状细胞(DC细胞)

英文名称： Human Mature Bone Marrow-Derived Dendritic Cells

组织来源： 腿骨髓组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人骨髓成熟DC细胞采用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞、培养过程添加细胞因子诱导而来。

质量检测  实验室分离的人骨髓树突状细胞（成熟DC细胞）经CD86免疫荧光鉴定、细胞形态等综合鉴定，纯度可达80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人骨髓树突状细胞(成熟DC细胞)完全培养基(含生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 半贴壁半悬浮

细胞形态： 圆形、树突状

传代比例： 不传代

传代特性： 属于高度分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人骨髓树突状细胞（成熟DC细胞）体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

骨髓单核细胞悬液洗涤后，加入 GM-CSF+IL-4 双因子诱导培养。

培养第 3 天半换液，补充细胞因子维持 DC 细胞分化环境。

培养第 6 天可见悬浮半贴壁典型树突状细胞。

第 7 天添加 LPS 刺激 DC 细胞成熟，上调共刺激分子表达。

轻柔吹打收集悬浮成熟 DC 细胞，PBS 洗涤备用。

流式检测 CD80、CD86、MHC-Ⅱ 成熟标志物鉴定纯度。

用于肿瘤免疫、抗原呈递、免疫共培养体外实验。

1.血管组织取材后需立即置于冰预冷的M199培养基中运输，尽快去除外膜结缔组织和脂肪组织。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.内皮细胞增殖较快，培养5-7天即可达到融合，传代时注意控制胰酶消化时间不宜过长。

4.培养基中需添加EGM-2内皮细胞生长添加剂套装，包含VEGF、FGF-b、EGF和hydrocortisone等关键生长因子。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。