人肝星状细胞

人肝星状细胞

从健康供体肝脏组织经胶原酶 II 原位灌注消化后收集肝细胞悬液，通过 20%/40% 双层 Percoll 梯度离心分离肝实质细胞（低密度层）和非实质细胞（高密度层），肝实质细胞接种于 Matrigel 包被培养皿中，使用 Hepatocyte Maintenance Medium（含 2% FBS、Dexamethasone、NGF 及 Transferrin）维持培养；通过免疫荧光显示 Albumin 胞质强阳性、CYP4A 膜染色阳性，并检测氨甲酰胆碱酯酶活性和糖原储存能力确认肝细胞分化表型。

产品名称：人肝星状细胞

英文名称： Human Hepatic Stellate Cells

组织来源： 肝脏组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人肝星状细胞采用混合酶灌流消化、低速离心、密度梯度离心制备而来。

质量检测  实验室分离的人肝星状细胞经α-SMA或Desmin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人肝星状细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人肝星状细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

肝脏组织原位两步胶原酶灌注消化，充分解离肝各类细胞组分。

密度梯度离心法分离肝星状细胞，去除肝细胞、内皮、免疫细胞。

收集星状细胞沉淀，专用低血清培养基重悬，避光接种培养皿。

避光静置 24h 促进星状细胞贴壁，首次全换液去除漂浮杂质。

每 2 天更换培养基，静止培养下细胞维持静息表型。

如需诱导活化，给予 TGF-β 刺激；传代仅在细胞融合 80% 时操作。

免疫荧光检测 Desmin、α-SMA 判断细胞静息 / 活化状态。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.细胞生长速率受血清批次影响较大，建议实验前对不同批次血清进行预实验筛选。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。