人肺微血管平滑肌

人肺微血管平滑肌

运用胶原酶消化法从健康供体肺微血管平滑肌血管组织中分离平滑肌细胞，经密度梯度离心纯化后接种于胶原 I 包被的培养表面，采用含有 10% FBS 和 5 ng/mL PDGF-BB 的 DMEM/F12 培养基进行体外扩增；通过 Western blot 和免疫荧光双重检测 α-SMA、SM22α、Calponin 及 SM-MHC 表达，并通过细胞迁移实验（Transwell）和收缩功能实验验证平滑肌细胞收缩表型。

产品名称：人肺微血管平滑肌

英文名称： Human Pulmonary Microvascular Smooth Muscle Cells

组织来源： 肺组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人肺微血管平滑肌细胞采用混合胶原酶消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的人肺微血管平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人肺微血管平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人肺微血管平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

收集肺微小血管丛组织，预冷缓冲液灌注冲洗微血管内残留血细胞。

复合胶原酶（Ⅰ+Ⅳ）37℃恒温震荡消化 60min，充分解离微血管壁平滑肌。

过滤后离心收集细胞，无血清培养基洗涤细胞沉淀 2 次去除酶残留。

添加微血管平滑肌专用完全培养基，接种于纤连蛋白包被培养板。

培养 48h 换液，去除混杂微血管内皮细胞，维持高胰岛素培养环境。

细胞汇合 80% 传代，消化后低速离心减少细胞凋亡，控制传代不超过 6 代。

功能实验前血清饥饿处理 24h，消除血清因子对平滑肌收缩功能干扰。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。