产品名称 | 人肺动脉成纤维细胞 | 组织来源 | 肺大动脉组织 |
英文名称 | Human Pulmonary Artery Fibroblasts | 种属 | 人 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2703 |
方法简介 实验室分离的人肺动脉成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的人肺动脉成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 人肺动脉成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人肺动脉成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：健康成人供体，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、I/II型胶原酶、DNase I、M199培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠胰蛋白酶(trypsin)elisa试剂盒 | MDA-MB-231+GFP人乳腺癌X细胞+GFP |
大鼠硫氧还蛋白还原酶(TrxR)elisa试剂盒 | 大鼠外根鞘细胞 |
大鼠硫氧化还原蛋白2(Trx2)elisa试剂盒 | 大鼠子宫微血管内皮细胞 |
大鼠辣椒素受体(TRPV1)elisa试剂盒 | HMEC-1 (人微血管内皮细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠CXC趋化因子配体1(CXCL1)elisa试剂盒 | 人小细胞肺癌NCI-H1048(STR鉴定正确) |
大鼠CXC趋化因子配体16(CXCL16)elisa试剂盒 | 小鼠主动脉外膜成纤维细胞 |
猪细胞色素P4502J2（CYP2J2）elisa试剂盒 | 大鼠原代骨髓肥大细胞 |
YAC-1小鼠淋巴瘤细胞专用培养基 | SATL1基因过表达细胞株 |
MB49+LUC小鼠膀胱癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | CRTAM基因过表达细胞株 |
大鼠原代肾上腺髓质细胞专用培养基 | CCNE2基因过表达细胞株 |
CAL33细胞专用培养基 | FBXW10B基因过表达细胞株 |
人原代腹膜微血管内皮细胞专用培养基 | GCM1基因过表达细胞株 |
人肺动脉成纤维细胞大鼠原代T淋巴细胞专用培养基 | GABRA3基因过表达细胞株 |
Capan-2细胞专用培养基 | FOXN2基因过表达细胞株 |
取肺动脉外膜结缔组织，剔除血管平滑肌层与内皮，PBS 多次冲洗去除红细胞。
组织块贴壁法培养，无需酶消化，将 1mm³ 组织块均匀铺于培养瓶底，倒置干燥 30min。
缓慢加入低血清成纤维培养基，缓慢平放培养瓶，37℃静置 5 天不移动培养瓶。
第 5 天观察组织块周边爬出梭形成纤维细胞，首次全换液去除漂浮组织碎块。
持续培养至细胞向外铺展汇合 85%，使用胰酶消化收集原代肺动脉成纤维细胞。
传代后降低接种密度至 2×10⁵个 /mL，减缓细胞增殖速度延长细胞使用寿命。
细胞冻存前 24h 更换新鲜培养基，保证细胞活力，复苏后 24h 即可贴壁生长。
