产品名称 | 人肺大动脉内皮细胞 | 组织来源 | 肺大动脉组织 |
英文名称 | Human Pulmonary Great Artery Endothelial Cells | 种属 | 人 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2679 |
方法简介 实验室分离的人肺大动脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的人肺大动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 人肺大动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人肺大动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：健康成人供体，每只可获得2-5x10^5个内皮细胞，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、I/II型胶原酶、DNase I、M199培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、兔抗细胞CD31抗体(用于流式分选)、ECM基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标血管/组织，用预冷PBS冲洗去除血液，仔细分离去除外膜和脂肪组织
将组织剪碎后加入0.25%胰蛋白酶，37度消化15-20分钟，收集消化液
再加入II型胶原酶，37度振荡消化45-60分钟，充分分散组织
消化液经70um和40um滤网依次过滤，300g离心10分钟收集细胞
用含CD31抗体的磁珠进行阳性/阴性分选，或采用差速贴壁法去除成纤维细胞，收集CD31+内皮细胞
原代培养要点
将纯化后的内皮细胞接种于明胶预包被的培养皿中，使用ECM基质胶包被可显著提高贴壁率
接种密度建议3x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养，内皮细胞通常24-72小时贴壁
使用内皮细胞专用培养基(含20%FBS、EGF 5ng/mL、FGF 2ng/mL、肝素10ug/mL)
每2-3天换液一次，细胞融合至80-90%时可用0.05%胰蛋白酶-EDTA传代
常见问题优化
内皮细胞被成纤维细胞污染：采用差速贴壁法2-3次，或CD31磁珠分选提高纯度
内皮细胞凋亡：培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632(10uM)可显著提高存活率
表达内皮标志物下降：传代次数控制在3代以内，冻存早期细胞以备后续使用
大鼠恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)elisa试剂盒 | MCF-7+luc人乳腺癌细胞荧光素酶标记 |
大鼠结节性硬化蛋白1(TSC1)elisa试剂盒 | 大鼠表皮干细胞 |
大鼠胰蛋白酶(trypsin)elisa试剂盒 | 大鼠海绵体内皮细胞 |
大鼠硫氧还蛋白还原酶(TrxR)elisa试剂盒 | NCI-H2228 [H2228; H-2228] (人肺癌细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠C-Raf原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶(CRAF；Raf-1)elisa试剂盒 | 人膀胱癌细胞EJ(STR鉴定正确) |
大鼠csksrc分子c端激酶(c-src)elisa试剂盒 | 小鼠肠黏膜微血管内皮细胞 |
猪细胞外信号调节激酶（ERK）elisa试剂盒 | 人原代子宫微血管内皮细胞 |
TM4正常小鼠睾丸Sertoli细胞专用培养基 | ATOH1基因过表达细胞株 |
MA-891小鼠乳腺癌高转移细胞专用培养基 | CATIP基因过表达细胞株 |
小鼠原代神经胶质细胞专用培养基 | SEL1L2基因过表达细胞株 |
Caco-2细胞专用培养基 | CBLIF基因过表达细胞株 |
人原代肝成纤维细胞专用培养基 | GDF11基因过表达细胞株 |
人肺大动脉内皮细胞大鼠原代B淋巴细胞专用培养基 | CAPS2基因过表达细胞株 |
Calu-3细胞专用培养基 | GLP1R基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 试剂：EGM-2 内皮专用培养基、肝素、Ⅰ 型胶原酶、无菌 PBS、75% 酒精。
2. 耗材：血管夹持器械、结扎线、离心管、培养瓶；人肺大动脉取自合法手术废弃标本。
3. 标本低温转运，全程无菌无热源操作。
二、取材与预处理
1. 取肺大动脉血管，剔除血管外膜脂肪纤维组织，肝素 PBS 冲净管腔内血液。
2. 血管两端结扎一端，PBS 灌入管腔反复冲洗内腔 3 次，排空液体。
3. 酒精擦拭血管外壁，严禁消毒液进入血管内部损伤内皮。
三、细胞分离与消化
1. 管腔内灌满 0.1%Ⅰ 型胶原酶，封口结扎，37℃水浴消化 20min。
2. 收集腔内消化液，培养基冲洗血管内壁，合并所有细胞悬液。
3. 1000rpm 离心 6min，弃上清，PBS 洗涤细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. EGM-2 完全培养基重悬细胞，接种培养瓶静置贴壁。
2. 16h 首次换液，去除悬浮死细胞与杂细胞，后续隔日换液。
3. 细胞融合后 1:2 传代，vWF、CD31 鉴定内皮细胞，人原代细胞建议 P1-P2 代使用。
