人肺成纤维细胞

人肺成纤维细胞

运用胶原酶 I 消化法从健康供体肺成纤维细胞组织中提取间充质成分，经密度梯度离心去除血液细胞后，接种于胶原 IV 包被的培养表面，使用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基培养；通过流式细胞术分析 CD90+、CD44+、CD105+ 阳性率及 CD34-、CD45- 阴性率，免疫荧光染色显示 vimentin 强阳性、角蛋白阴性，并经成纤维细胞集落形成实验验证增殖能力。

产品名称：人肺成纤维细胞

英文名称： Human Lung Fibroblasts

组织来源： 肺组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人肺成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的人肺成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人肺成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人肺成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌分离人正常肺边缘无病变组织，预冷无菌 PBS 冲洗血污，剪去肺泡、血管杂质，切碎成细小组织碎块。

采用 0.125% 胰酶 37℃分次消化，每次 20min，分 3 次收集细胞悬液，减少上皮细胞混杂。

全部收集悬液混匀，800r/min 离心 5min，弃上清，低血清成纤维专用培养基重悬。

调整细胞密度 3×10⁵个 /mL 接种普通塑料培养瓶，恒温培养箱静置 24h 让成纤维细胞优先贴壁。

24h 半换液，舍弃漂浮肺泡上皮细胞，后续每 3 天全量更换培养基。

细胞汇合至 90% 进行传代，消化时间控制在 2min，防止成纤维细胞损伤老化。

冻存时使用含 10% DMSO 的细胞冻存液，梯度降温后液氮保存，复苏 37℃快速融化。

1.手术获取组织后需立即在显微镜下剥离平滑肌层，避免成纤维细胞等杂细胞过度污染。

2.培养器皿无需特殊包被，普通培养板即可支持平滑肌细胞贴壁，但用纤连蛋白包被可增强细胞贴附。

3.该细胞体外传代能力较强，建议3-5代内使用，过高代次可能导致收缩表型标志物表达下降。

4.培养基中补充10%FBS和0.1uM苯肾上腺素可维持平滑肌细胞收缩表型相关蛋白表达。

5.使用人源组织标本需获得伦理委员会批准及患者知情同意，操作需符合生物安全规范。 换液时每2-3天更换一次新鲜培养基，注意观察细胞形态变化，收缩型细胞呈梭形峰谷状排列。