人胆管癌组织源细胞

人胆管癌组织源细胞

运用酶消化-密度梯度离心联合法从健康供体手术切除的肿瘤组织中分离原代癌细胞，经胶原酶 I/II 和 Dispase 联合消化后通过 30%-50% 连续 Percoll 梯度离心富集肿瘤细胞，接种于 Matrigel 预包被的培养皿中使用肿瘤专用培养基（含 10% FBS、EGF 20 ng/mL、bFGF 5 ng/mL 及 Hydrocortisone）培养；通过免疫荧光检测上皮-间质转化（EMT）标志物 E-cadherin/Vimentin 表达转换、CK5/6 及 p63 等癌细胞标志物

产品名称：人胆管癌组织源细胞

英文名称： Human Bile Duct Cancer Tissue-Derived Cells

组织来源： 胆管癌组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的癌组织源细胞采用胶原酶消化、经Percoll离心纯化制备而来。

质量检测  实验室分离的人胆管癌组织源细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人胆管癌组织源细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人胆管癌组织源细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌取新鲜胆管癌手术组织样本，预冷含双抗的 PBS 反复冲洗 3 次，剔除周边正常胆管、脂肪及坏死钙化组织，剪碎至 1mm³ 微小组织块。

加入 Ⅰ 型胶原酶 + 透明质酸酶混合消化液，37℃恒温摇床低速震荡消化 90min，期间每 20min 轻柔吹打一次组织悬液。

消化完成后加入完全培养基终止酶解，70μm 细胞筛过滤去除未消化组织残渣，收集滤液至离心管。

1200r/min 离心 6min，弃上清，添加专用胆管癌细胞完全培养基重悬细胞沉淀。

细胞计数后按 5×10⁵个 /cm² 接种于包被胶原 Ⅰ 的培养瓶，置于 37℃、5% CO₂恒温培养箱静置培养 48h。

48h 后首次换液，清除未贴壁血细胞、肿瘤坏死碎片，后续每 2 天更换一次完全培养基。

细胞融合度达 80%-85% 时，胰酶 - EDTA 温和消化传代；仅取 P2-P4 代细胞用于后续实验，避免肿瘤细胞异质性改变。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.内皮细胞体外具有增殖能力，传代比例建议1:3至1:4，细胞融合达80-90%时需及时传代避免接触抑制。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。