产品名称 | 人肠静脉内皮细胞 | 组织来源 | 肠静脉组织 |
英文名称 | Human Intestinal Vein Endothelial Cells | 种属 | 人 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2821 |
方法简介 实验室分离的人肠静脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的人肠静脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 人肠静脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： Accutase消化液或0.25%胰蛋白酶
人肠静脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：健康成人供体，每只可获得2-5x10^5个内皮细胞，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、I/II型胶原酶、DNase I、M199培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、兔抗细胞CD31抗体(用于流式分选)、ECM基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标血管/组织，用预冷PBS冲洗去除血液，仔细分离去除外膜和脂肪组织
将组织剪碎后加入0.25%胰蛋白酶，37度消化15-20分钟，收集消化液
再加入II型胶原酶，37度振荡消化45-60分钟，充分分散组织
消化液经70um和40um滤网依次过滤，300g离心10分钟收集细胞
用含CD31抗体的磁珠进行阳性/阴性分选，或采用差速贴壁法去除成纤维细胞，收集CD31+内皮细胞
原代培养要点
将纯化后的内皮细胞接种于明胶预包被的培养皿中，使用ECM基质胶包被可显著提高贴壁率
接种密度建议3x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养，内皮细胞通常24-72小时贴壁
使用内皮细胞专用培养基(含20%FBS、EGF 5ng/mL、FGF 2ng/mL、肝素10ug/mL)
每2-3天换液一次，细胞融合至80-90%时可用0.05%胰蛋白酶-EDTA传代
常见问题优化
内皮细胞被成纤维细胞污染：采用差速贴壁法2-3次，或CD31磁珠分选提高纯度
内皮细胞凋亡：培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632(10uM)可显著提高存活率
表达内皮标志物下降：传代次数控制在3代以内，冻存早期细胞以备后续使用
大鼠血小板反应蛋白1(TSP-1；THBS1)elisa试剂盒 | LS513人结直肠癌细胞 |
大鼠总超氧化物歧化酶(T-SOD)elisa试剂盒 | 大鼠骨骼肌细胞 |
大鼠促甲状腺激素受体(TSHR)elisa试剂盒 | 大鼠乳腺成纤维细胞 |
大鼠肿瘤坏死因子诱导蛋白6(TSG-6)elisa试剂盒 | Kasumi-1 (人急性原粒细胞白血病细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ(PRKG2)elisa试剂盒 | 人弥漫大B淋巴瘤细胞WSU-DLCL-2(STR鉴定正确) |
大鼠c-Jun氨基末端激酶2(JNK2)elisa试剂盒 | 人宫颈上皮细胞 |
猪细小病毒抗体（PV Ab）elisa试剂盒 | 绵羊原代软骨细胞 |
SVEC4-10小鼠淋巴结血管上皮样 细胞专用培养基 | GALR1基因过表达细胞株 |
LLC+LUC小鼠肺癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | CCNE2基因过表达细胞株 |
猪原代胰腺导管上皮细胞专用培养基 | ENOX2基因过表达细胞株 |
C6+luc细胞专用培养基 | GPR139基因过表达细胞株 |
人原代肝外胆管上皮细胞专用培养基 | GABRA3基因过表达细胞株 |
人肠静脉内皮细胞大鼠脑微血管内皮细胞永生化细胞专用培养基 | PRAM1基因过表达细胞株 |
Caki-1细胞专用培养基 | ATOH1基因过表达细胞株 |
肠静脉分离：精细剥离小肠静脉血管，PBS 冲洗管腔内血液
腔内消化灌注：胰酶溶液注入血管腔，封闭两端水浴消化内皮
细胞收集冲洗：培养基反复冲刷血管内壁，收集内皮细胞悬液
纯化培养：差速贴壁去除平滑肌细胞，明胶包被板促内皮贴壁
炎症损伤建模：TNF-α 诱导静脉内皮炎症损伤，模拟静脉炎模型
通透性检测：Transwell 检测内皮单层屏障通透性变化
分批次冻存：未损伤静息态内皮细胞分装保存，用于对照实验
