产品名称 | 人表皮角质形成细胞 | 组织来源 | 皮肤组织 |
英文名称 | Human Epidermal Keratinocytes | 种属 | 人 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3044 |
方法简介 实验室分离的人表皮角质形成层细胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-胶原酶混合消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的人表皮角质形成细胞经K5免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 人表皮角质形成细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人表皮角质形成细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：健康成人供体，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、I/II型胶原酶、DNase I、M199培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠转位因子蛋白(TSPO)elisa试剂盒 | LS174T人结直肠腺癌细胞 |
大鼠血小板反应蛋白1(TSP-1；THBS1)elisa试剂盒 | 大鼠软骨细胞 |
大鼠血小板反应蛋白;凝血酶敏感蛋白(TSP)elisa试剂盒 | 大鼠卵巢表面上皮细胞 |
大鼠促甲状腺激素受体(TSHR)elisa试剂盒 | HSPC-1 (人造血干细胞) |
大鼠CD8分子(CD8)elisa试剂盒 | 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化)PC-12（种属鉴定） |
大鼠c-fos(c-fos)elisa试剂盒 | 人扁桃体间质细胞 |
猪纤溶酶原激活物抑制因子（PAI）elisa试剂盒 | 人原代腹膜间皮细胞 |
SV40-MES-13小鼠肾小球系膜细胞专用培养基 | COLQ基因过表达细胞株 |
LLC小鼠肺癌细胞专用培养基 | GORAB基因过表达细胞株 |
大鼠原代皮下微血管内皮细胞专用培养基 | CAVIN4基因过表达细胞株 |
C3H/10T1/2Clone8细胞专用培养基 | ABHD6基因过表达细胞株 |
人原代肝星状细胞专用培养基 | MTMR10基因过表达细胞株 |
人表皮角质形成细胞大鼠海绵体内皮细胞永生化细胞专用培养基 | GLP1R基因过表达细胞株 |
C918细胞专用培养基 | CACNB1基因过表达细胞株 |
皮肤标本预处理：无菌皮片剔除皮下脂肪，预冷 PBS 冲洗血污
冷热两步消化：先冷胰酶分离表皮，再热消化解离角质单细胞
免疫纯化：CD31 磁珠清除内皮杂细胞，富集角质形成细胞
增殖培养：低钙无血清培养基维持细胞增殖未分化状态
角质分化诱导：升高培养基钙离子浓度，诱导角质层形成
创面损伤模型：细胞划痕实验构建体外皮肤创面模型，检测修复能力
细胞冻存：初代、二代细胞单独分装，标注细胞来源皮片部位
