产品名称 | 鸡小肠黏膜上皮细胞 | 组织来源 | 小肠组织 |
英文名称 | Chicken Small Intestinal Mucosal Epithelial Cells | 种属 | 三黄鸡 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2719 |
方法简介 实验室分离的鸡小肠黏膜上皮细胞采用中性蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的鸡小肠黏膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 鸡小肠黏膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
鸡小肠黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SPF级鸡胚(E10-E12)，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、胶原酶、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠肌联蛋白(TTN)elisa试剂盒 | LN229+LUC人胶质瘤细胞荧光素酶标记 |
大鼠甲状腺转录因子1(TTF1)elisa试剂盒 | 大鼠子宫内膜干细胞 |
大鼠总三碘甲腺原氨酸(TT3)elisa试剂盒 | 大鼠卵巢颗粒细胞 |
大鼠四旋蛋白2(TSPAN2)elisa试剂盒 | IMR-90 (人胚肺成纤维细胞)(STR鉴定正确) |
大鼠CD56分子(CD56)elisa试剂盒 | 小鼠黑色素瘤带绿色荧光B16+GFP（种属鉴定） |
大鼠CD63分子(CD63)elisa试剂盒 | 人腹膜间皮细胞 |
猪线粒体呼吸链复合体Ⅱ（MRCC II）elisa试剂盒 | 小鼠原代胰腺腺泡细胞 |
Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞专用培养基 | BCL3基因过表达细胞株 |
J774A.1小鼠单核巨噬细胞专用培养基 | CCN3基因过表达细胞株 |
猪原代子宫内膜上皮细胞专用培养基 | ARMCX1基因过表达细胞株 |
BxPC-3细胞专用培养基 | BMP6基因过表达细胞株 |
人原代睾丸支持细胞专用培养基 | CAGE1基因过表达细胞株 |
鸡小肠黏膜上皮细胞Z-138细胞专用培养基 | SATB2基因过表达细胞株 |
C6+luc细胞专用培养基 | ASB2基因过表达细胞株 |
肠道组织清洗：无菌截取鸡空肠段，预冷 PBS 反复冲洗肠内容物
外翻消化处理：肠管外翻绑定玻璃棒，EDTA 消化液 37℃浸泡解离绒毛上皮
振荡收集细胞：间断摇晃释放小肠上皮细胞，过滤去除绒毛组织残渣
免疫纯化筛选：利用上皮细胞特异性黏附特性，差速贴壁剔除肌成纤维细胞
屏障培养：接种胶原包被 Transwell 小室，构建肠道上皮屏障模型
通透性造模：待单层细胞跨上皮电阻稳定后，开展药物 / 毒素刺激实验
细胞留存：实验结束收集细胞，程序冻存备用，留存上清检测细胞因子
